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围产期奶牛巨噬细胞对乳腺炎症反应的影响 目 录 摘 要 i Abstract iv 缩略语表 vii 引言 1 第一部分 文献综述 2 1 围产期奶牛乳腺细胞凋亡与增殖及相关炎症反应 2 1.1 围产期乳腺细胞凋亡 2 1.2 乳腺细胞凋亡的调节 2 1.2. 1 STAT3 调节方式 2 1.2.2 TGFβ 调节方式 3 1.3 围产期乳腺细胞增殖 3 1.4 乳腺细胞增殖的调节 4 1.4. 1 STAT5 调节方式 4 1.4.2 IGF-1 调节方式 4 1.4.3 PRL 、VEGF 、HGF 调节方式 5 1.5 围产期乳腺分泌物乳成分变化 5 1.6 围产期奶牛乳腺炎症反应 6 1.7 巨噬细胞抑制乳腺炎症反应 6 2 巨噬细胞清除凋亡细胞相关信号机制 7 2.1 凋亡细胞释放“找我”信号招募巨噬细胞 7 2.2 凋亡细胞表达“吃我”信号介导吞噬作用 8 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位（毕业）论文 2.2.1 PSR 受体 8 2.2.2 α β 受体 8 V 3 2.2.3 TAM 受体 9 2.2.4 “不吃我”信号 9 2.3 吞噬及消化凋亡细胞 10 3 巨噬细胞吞噬凋亡细胞促进IL-10 分泌相关信号通路 10 3.1 巨噬细胞清除凋亡细胞促进IL-10 分泌 10 3.2 巨噬细胞分泌IL-10 的信号通路 10 3.3 p38 介导巨噬细胞清除凋亡细胞时IL-10 的表达11 4 研究目的与意义 12 第二部分 材料与方法 13 1 试验时间与地点 13 2 动物试验及分组 13 2.1 干奶早期奶牛 13 2.2 泌乳早期奶牛 13 3 试验日粮与饲养管理 13 4 试验测定项目及方法 14 4.1 乳腺组织活体取样 15 4.2 乳样、乳腺分泌物收集及乳成分测定 15 4.3 乳腺组织RNA 提取、cDNA 合成及荧光定量PCR 测定 15 4.3.1 RNA 提取步骤 15 4.3.2 反转录步骤 16 4.3.3 荧光定量PCR 步骤 16 II 围产期奶牛巨噬细胞对乳腺炎症反应的影响 4.3.4 相关基因引物序列信息 16 4.4 乳腺组织切片处理 17 4.4.1 石蜡切片制作 17 4.4.2 HE 染色 18 4.4.3 TUNEL 标记乳腺组织凋亡细胞 18 4.4.4 Ki 67 蛋白标记乳腺组织增殖细胞 18 4.4.5 细胞计数 19 5 细胞试剂及耗材 19 5.1 试剂 19 5.2 仪器 19 6 乳腺上皮细胞凋亡模型得构建 19 7 奶牛外周血单核细胞诱导分化巨噬细胞 20 8 凋亡乳腺上皮细胞与巨噬细胞共培养 20 9 数据处理与分析 20