不育临界温度不同的培矮64S近等基因系育性相关小RNA差异分析.pdfVIP

不育临界温度不同的培矮 64S 近等基因系育性相关小 RNA 差异分析 目 录 摘 要 i Abstract iii 缩略词表 vi 1 前言 1 1.1 作物两系法杂种优势利用技术及应用 1 1.1.1 作物两系法杂种优势利用途径 1 1.1.2 两系法杂交水稻与光温敏核不育系 1 1.1.3 两系杂交水稻应用中存在的不育系温度稳定性问题 2 1.2 光温敏核不育的育性转换研究进展 2 1.2.1 光温敏核不育水稻的类型 2 1.2.2 育性转换温度敏感期 3 1.2.3 不育临界温度性状的遗传特性 4 1.2.4 不育临界温度不同的培矮 64S 近等基因系 4 1.2.5 育性温度反应的基因定位与克隆 5 1.3 miRNA 与光温敏核不育水稻育性转换研究进展 5 1.3.1 miRNA 及其功能 5 1.3.2 miRNA 研究技术：靶基因验证技术 7 1.3.3 miRNA 与花器官发育调节 8 1.3.4 miRNA 参与温度的响应 9 1.3.5 光温敏雄性不育水稻育性与小 RNA 调控 10 1.4 本研究的目的与意义 10 2 材料与方法 12 2.1 实验材料 12 2.2 技术路线 12 2.3 材料种植 13 2.4 材料温度处理 14 2.5 取样方法 14 2.6 育性测定 14 I 华中农业大学 2020 届硕士研究生学位论文 2.7 总 RNA 的提取 15 2.8 降解组文库构建以及测序结果分析 15 2.8.1 RNA 的分离、纯化和质控 15 2.8.2 cDNA 文库制备与测序 15 2.8.3 降解组测序结果分析 15 2.9 反转录及 PCR 检测 16 2.9.1 miRNA 的反转录 16 2.9.2 RNA 的反转录 16 2.10 荧光定量 PCR 测定 17 3 结果与分析 19 3.1 不同温度处理下的花粉育性 19 3.2 不同温度处理下 miRNA 降解组差异分析 21 3.2.1 降解组数据概括 21 3.2.2 miRNA 降解位点鉴定 22 3.2.3 miRNA 降解片段的功能注释分析 25 3.3 转录组、小RNA 以及降解组联合分析 29 3.3.1 联合分析结果基本分析 29 3.3.2 与细胞分裂分化相关 miRNA 以及对应靶基因 30 3.3.3 与次生代谢相关的 miRNA 及其靶基因 33 3.3.4 与植物激素相关的 miRNA 及其靶基因 36 3.4 差异 miRNA 及其靶基因 PCR 验证 39 4 讨论 49 4.1 降解组测序以及多组学联合分析 49 4.2 关键 miRNA 及其靶基因与育性的关系 49 结论 54 参考文献 55 致 谢 65