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SVCV 感染导致ROS 蓄积诱发炎症的病理机制研究 目录 摘要i Abstractiii 缩略词表v 第一章 文献综述1 1. 鲤春病毒血症病毒的研究进展1 2. 炎症的研究进展2 2.1 核因子-κB （NF-κB）信号通路3 2.2 丝裂原活化蛋白激酶 （MAPK）信号通路4 2.3 磷脂酰肌醇-3-激酶 （PI3K）信号通路5 2.4NOD 样受体家族3 （NLRP3）炎性小体6 3.ROS与炎症7 4. 炎症与病毒感染8 5. 目的与意义9 第二章 ROS 蓄积与SVCV 诱导炎症之间的关系 10 1. 材料与方法10 1.1 实验材料10 1.1.1 细胞与病毒10 1.1.2 实验试剂10 1.1.3 实验室仪器设备11 1.1.4PCR 引物的设计与合成11 1.2 试验方法12 1.2.1细胞复苏及传代培养12 1.2.2 细胞攻毒实验13 1.2.3MTT 法测定药物毒性13 1.2.4 各抑制剂处理EPC细胞14 1.2.5 实时荧光定量PCR 检测相关基因转录水平 14 1.2.6 免疫印迹试验17 1.2.7 双荧光素酶报告实验20 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位论文 1.2.8 病毒滴度的测定22 1.3 统计分析22 2. 结果与分析23 2.1SVCV 感染诱发炎症反应23 2.2ROS 蓄积与炎症反应的关系24 2.3MTT 法检测各抑制剂的细胞毒性25 2.4NF-κB 信号通路分析26 2.5AP-1活化与ROS 的关系28 2.6MAPK/AP-1与炎症反应的关系29 2.7PI3K 通路与炎症反应的关系30 2.8 炎症信号通路与SVCV 复制32 3.讨论33 参考文献36 附录49 致谢50 II SVCV 感染导致ROS 蓄积诱发炎症的病理机制研究 摘要 鲤春病毒血症病毒（springviremiaofcarp virus, SVCV）感染所致的症状是腹 膜炎及出血性肠炎等炎症性损伤，但其炎症发生机制尚未知。前期研究表明， SVCV 感染黑头软口鲦上皮瘤细胞 （EpitheliomaPapulosum Cyprini,EPC）破坏 线粒体结构，影响线粒体复合体III 的功能，导致活性氧（Reactiveoxygen species, ROS），尤其是H O 的蓄积。ROS可以激活炎症信号系统，引发炎症反应。为 2 2 此，本文从ROS角度，探究SVCV 诱发炎症的病理机制。主要研究结果如下： 1. SVCV-ROS-炎症之间的关系 用0.1MOI 的SVCV 感染EPC细胞，以0.5mM 的H O 和1μg/mL 的LPS