牛樟芝三萜的分离纯化与抗肿瘤活性研究.pdfVIP

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2021-01-11 发布于江苏
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牛樟芝三萜的分离纯化与抗肿瘤活性研究.pdf

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牛樟芝三萜的分离纯化与抗肿瘤活性研究目录摘要i Abstract iii 缩略语表 v 1 前言 1 1.1 概述 1 1.2 牛樟芝三萜分离纯化研究进展5 1.2.1 牛樟芝三萜分离6 1.2.2 牛樟芝三萜的进一步纯化8 1.3 牛樟芝三萜体外抗肿瘤作用机理 10 1.3.1 经典凋亡通路诱导细胞凋亡 10 1.3.2 DNA 损伤诱导凋亡 12 1.3.3 抑制肿瘤细胞转移 12 1.4 研究目的与研究内容 13 1.4.1 研究目的 13 1.4.2 主要内容 14 2 材料方法 15 2.1 菌种和细胞 15 2.2 主要试剂 15 2.3 主要实验仪器 16 2.4 方法 17 2.4.1 牛樟芝三萜粗提物(ACTs)的获取及含量检测 18 2.4.2 牛樟芝三萜分离条件优化20 2.4.3 牛樟芝三萜高效液相色谱（HPLC ）检测条件的建立21 2.4.4 ACTs-c 的LC-MS 检测及非靶向代谢组分析22 2.4.5 肿瘤细胞的体外培养23 2.4.6 体外抗肿瘤活性的检测25 2.4.7 牛樟芝三萜对凋亡通路蛋白的作用25 2.4.8 肿瘤细胞凋亡和周期阻滞分析26 2.4.9 细胞线粒体分离27 2.5 数据统计与分析28 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位论文 3 结果与分析29 3.1 牛樟芝三萜粗提物ACTs 含量的检测29 3.2 硅胶柱层析条件的优化30 3.2.1 流动相的确定30 3.2.2 层析柱径高比的确定32 3.3 ACTs 的高效液相色谱分析33 3.3.1 各组分的HPLC 检测结果34 3.3.2 ACTs-a 的HPLC 检测与纯化35 3.4 ACTs-c 组分LC-MS 检测及非靶向代谢组学分析38 3.5 牛樟芝三萜（ACTs ）的抗肿瘤活性40 3.5.1 ACTs 对 HeLa 细胞的影响40 3.5.2 ACTs 对HeLa 细胞周期阻滞的影响41 3.5.3 ACTs 对HeLa 细胞凋亡通路蛋白与周期通路蛋白的影响43 3.6 ACTs-a 的抗肿瘤活性44 3.6.1 ACTs-a 对HeLa 细胞的影响44 3.6.2 ACTs-a 对 S180 细胞的影响46 3.7 ACTs-b 的抗肿瘤活性47 3.8 ACTs-c 的抗肿瘤活性47 3.8.1 ACT-c 对 HeLa 细胞的影响47 3.8.2 ACT-c 对S180 细胞的影响49 3.9 ACTs-c 对HeLa 细胞凋亡通路蛋白与周期通路蛋白的影响50 4 小结与讨论53 4.1 小结53 4.2 讨论54 4.3 展望55 参考文献57 致谢64 硕士期间论文发表情况65