缓激肽受体1_2和基质金属蛋白酶7_9_13调控大肠杆菌感染诱导中枢炎症反应的分子机制.pdfVIP

缓激肽受体1/2 和基质金属蛋白酶7/9/13 调控大肠杆菌感染诱导中枢炎症反应的分子机制 目录 摘 要 i Abstract ii 缩略词表（Abbreviation ） iv 1 文献综述 1 1.1 肠外致病性大肠杆菌研究进展 1 1.1.1 肠外致病性大肠杆菌概述 1 1.1.2 肠外致病性大肠杆菌的流行病学特征 1 1.2 细菌性脑膜炎概述 2 1.2.1 细菌性脑膜炎研究现状 2 1.2.2 血脑屏障的构成 2 1.2.3 细菌性脑膜炎的形成过程 3 1.2.4 细菌性脑膜炎与中枢炎症 4 1.3 缓激肽与激肽释放酶激肽系统 6 1.3.1 缓激肽及缓激肽受体结构及功能 6 1.3.2 缓激肽及缓激肽受体在中枢炎症中的作用 7 1.4 基质金属蛋白酶（MMPs ） 8 1.4.1 基质金属蛋白酶的结构及功能 8 1.4.2 基质金属蛋白酶在中枢炎症中的作用 9 2 目的与意义 11 3 材料与方法 12 3.1 实验材料 12 3.1.1 菌株、细胞 12 3.1.2 试剂和试剂盒 12 3.1.3 培养基及抗生素的配制 13 3.1.4 主要溶液的配制 13 3.1.5 主要仪器 14 3.1.6 实验动物 14 3.1.7 引物 14 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位论文 3.2 试验方法 16 3.2.1 E. coli 菌株的复苏和传代培养 16 3.2.2 细胞的复苏和传代培养 16 3.2.3 致脑膜炎E. coli 感染 U251 细胞实验 17 3.2.4 小鼠感染以及药物处理实验 17 3.2.5 细胞以及组织样品RNA 、蛋白的提取 18 3.2.6 SYBR Green 法荧光定量PCR 19 3.2.7 蛋白质免疫印迹 20 3.2.8 细胞因子和趋化因子检测 21 3.2.9 构建pcDNA3.1-MMP 过表达载体 21 3.2.10 质粒的转染 25 3.2.11 免疫荧光 25 3.2.12 统计学分析 26 4 结果与分析 26 4.1 体内外PCN033 感染BDKRB1/2 的表达情况 26 4.2 抑制BDKRB1/2 对PCN033 诱导的CNS 炎症影响 27 4.3 PCN033 诱导MMP7,9,13 表达 29 4.4 MMP7,9,13 介导PCN033 感染中炎性因子变化 30 4.5 PCN033 通过BDKRB1/2 上调MMP7,9, 13 33 4.6 BDKRB1/2 介导NF-κB 信号通路的激活 34 4.7 MMPs 为NF-κB 信号通路下游分子 36 4.8 PCN033 通过BDKRB1/2-Pyk2-NF-κB 调控MMPs 36 5 讨论 38 5.1 BDKRB1/2 对于致脑膜炎E. coli 诱导的CNS 炎症的调控作用 38 5.2 致脑膜炎E. coli 感染中MMPs 对于炎性相关分子的调控作用 39 5.3 致脑膜炎E.coli 感染的U251 细胞中BDKRB1/2 调控MMPs 的分子机制 40 6 结论 43 致 谢 54 II 缓激肽受体1/2 和基质金属蛋白酶7/9/13 调控大肠杆菌感染诱导中枢炎症反应的分子机制 摘 要 肠外致病性大肠杆菌靶向中枢神经系统 （CNS ），破坏血脑屏障，造成神经元 坏死和功能紊乱，并引发 CNS 过度炎症反应。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases ，MMPs) 可降解细胞外基质；破坏血脑屏障；激活胶质细胞和巨 噬细胞；促进炎性因子释放，对神经炎症的形成起重要作用。此外，有研究表明缓 激肽（BK ）