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SEC/GPC凝胶渗透色谱分析的工作原理 PS-OBG用作尺寸排除色谱（size exclusion chromatography,又称凝胶渗透，gel permeation chromatography测量大分子分子量时的标准样品。 首先介绍尺寸排除色谱（SEC/GPC）的工作原理： 如图三所示，红色和紫色两种颗粒代表不同尺寸的两种高分子， 蓝色月牙形颗粒 代表色谱柱内的填料。通常色谱柱填料是经过设计的具有不同孔径的高分子凝胶 珠。当红色和紫色的高分子进入色谱柱以后， 以一定速度流动的流动相在不停地 冲洗色谱柱的同时，带动高分子颗粒在色谱柱内的移动。当高分子与凝胶珠填料 接触时，尺寸大的高分子不能进入凝胶珠填料的孔，如图三中红色的大分子。所 以红色的大分子在流动相的冲洗下先流出色谱柱。 而紫色的尺寸较小的高分子可 以进入凝胶填料珠的小孔，好像暂时被填料保留住了一样，最后由于流动相不停 的冲洗，紫色高分子也会流出色谱柱，但是流出的时间较红色分子长了很多。 图 三右下方给出红色高分子和紫色高分子的凝胶色谱图， 横坐标为保留时间，可以 看出红色高分子的保留时间明显小于紫色高分子，这说明红色高分子分子量较 大，比紫色高分子先流出色谱柱。 Large particles cannot enter 图三 gel and are excluded, 一 They have less volume to traverse and elute sooner. Small particles can enter gel and have more volume to traverse. They elute later. flowtime flow time 色谱柱的工作原理告诉我们，尺寸排除色谱可以将尺寸不同的高分子按照保留时 间分开。保留时间越小的高分子（也就是流经色谱柱需要时间越短的高分子） 的 分子量越大，相反，保留时间越大的高分子（也就是流经色谱柱需要时间越长的 高分子）的分子量越小。 懂得了这个原理，我们就可以用 SEC/GPC来测分子量了! 但是，如何根据保留时间来确定高分子的分子量呢？也就是说， 怎么将不同的保 留时间与分子量一一对应起来呢？这时我们需要制定一条标准工作曲线。 标准工 作曲线的目的是建立保留时间和分子量的关系，当我们用 SEC/GPC测定了一个 未知的高分子，得到这个高分子的流出时间（保留时间），有了工作曲线，我们 就可以很快知道这个未知高分子的分子量。 标准工作曲线的制定 标准工作曲线由一系列分布很窄，分子量已知的高分子标样做出，同时标样的结 构和分子链的构象要与未知高分子尽可能的接近。 ?首先选用与被测样品类型相似 的单分散性（d 1?标样。先用其他方法精确 测定其绝对分子量（百特纯使用激光光散射的方法测得 PS-OBG的绝对分 子量）。 ?然后将PS-OBG标样进行SEC/GPC分析，得到每个窄分布标样的峰位淋 洗体积（Ve）,也就是每个标样在色谱柱内的保留时间 流速。 以Ve为X轴，logM为丫轴作图，这样就可以得到校正曲线。 IgA? = A-BV. 式中,A,B为常数，A表示排斥极限，B表示渗透极限 将待测高分子进行SEC/GPC分析，得到待测高分子的峰位淋洗体积 V 在标准曲线上将V推回丫轴得到logM ，此M 即为待测高分子的分子量。 百特纯大分子（武汉）科技有限公司是由供职于加拿大联邦政府农业部国家实验 室科学家及其他投资人共同创办。目前主要从事碳水化合物大分子领域新品研发 及应用。百特纯的目标是向高等研究单位、院校提供高质量、高纯度、高均一性 （极窄分子量分布），特定结构的医药及功能性碳水化合物大分子标准品及凝胶 色谱标样，燕麦葡聚糖标样,1%精制燕麦OBG水溶液。