高通量实验室设计-李金明-2015年.pdf

高通量测序实验室设计及 无创产前筛查室间质量评价 李金明 国家卫生计生委临床检验中心 检验申请单， 涉及临床医生 标本采集、 标本采集环节 运送和保存 和实验室 （分析前） 结果报告解 质量 室内质控 释及临床应 （分析中） 用（分析后） 保证 涉及实验室人 涉及实验室 员和临床医生 质量控制 室间 质评 涉及实验室 （分析中） 分析前 检验申请单和标本采集、运送和保存 中的关键点  对 “Who”在 “When”开出 “What”申请单  容器：密闭的、一次性、无菌、无核酸酶及其他 扩增抑制物  采集方法：人 （训练有素）、防污染、处理  运送保存时间和温度：尽可能快？低温？  合格标本:容器完整、量够、时间符合要求、外观 符合要求、处理符合要求 用于NIPT的外周血cffDNA特点  母体血浆中cffDNA含量占总游离DNA的大约5〜10％，长 约150bp，怀孕4周即能检出，其在血液中的半衰期只有 16min，出现2小时后即不能测出。  cffDNA在母体循环中较稳定，可能与来源于胎盘的微粒 能够保护他们免受核酸酶降解相关。  Cff DNA随着妊娠孕龄增加而增多，在前三个月每周增加 21 ％，在孕中期上升速度较慢，在孕期的后八个星期又急 剧上升。  cff DNA在-20℃下可稳定超过4年，但血浆样本在-20℃下 长时间保存，cff DNA每月以- 0.66GE/ml速率降解。 分析中 影响质量的关键点  实验室环境条件：分区、温湿度  仪器设备状态：维护、定期校准  试剂质量：性能验证、质检  人员能力：外部和内部培训，能力评估  室内质量控制 室间质量评价 高通量测序实验室设计问题？  高通量测序检测实验室是否要分区？如果 要分区，分多少个区？  缓冲间有何作用？  使用什么样的生物安全柜？  实验室通风的要求？  实验室环境条件的要求？ 产前筛查与产前诊断 （全基因组低拷贝测序技术） 测序区 文库扩增 标本与文 试剂准备区 与检测区 库制备区 空气流向 空气流向 空气流向 空气流向 缓冲间 缓冲间 缓冲间 缓冲间 专用走廊 工作流向 标本与文库制备区 文库扩增与检测区 测序区 植入前胚胎遗传学诊断(全基因组低拷贝测序) 电泳区 测序区 文库检测区 扩增一区 WGA制备区 试剂准备区 空气流向 空气流向 空气流向 空气流向 空气流向