过敏性哮喘动物模型.pdfVIP

解螺旋 陪伴医生科研成长 过敏性哮喘动物模型 1. 实验原理 过敏性哮喘(allergic asthma)的发病机制涉及引起过敏的抗原。抗原一般具备两种特 性：一是免疫原性，即能刺激机体产生免疫应答，包括特异性抗体和致敏T 细胞；二是抗原 性，系指能与抗体或致敏T 细胞在体内外发生特异性结合。 过敏性哮喘模型的复制需要致敏和激发两个步骤。动物以卵清蛋白(ovalbumin，卵白蛋 白)为致敏的抗原(有时并用免疫佐剂如氢氧化铝、灭活百日咳杆菌菌苗等)，经腹腔或皮下 注射，刺激机体产生IgE，并结合在肥大细胞等细胞表面，使机体处于致敏状态。 一定时间后当动物再次接触到相同抗原后，发生I 型速发型过敏反应，呼吸道粘膜肥大 细胞等合成并释放多种生物活性物质，引起支气管平滑肌收缩、粘液分泌增多、血管通透性 增高和炎症细胞浸润等(激发)，导致哮喘发作。解螺旋/ 2. 实验目的 建立过敏性哮喘实验动物模型，对其进行相关研究。 3. 实验材料 3.1. 主要试剂 试剂 来源 Cat.No. 卵清蛋白 Sigma A5503 乙酰甲胆碱 Sigma A2251 氢氧化铝凝胶 百灵威科技有限公司 21645-51-2 苏木精-伊红染液 碧云天 C0105 Diff-quick 快速染色试剂盒 上海翊圣生物科技有限公司 40748ES60 3.2. 主要仪器 仪器名称 来源 型号 1 解螺旋 陪伴医生科研成长 雾化器 江苏鱼跃公司 402B 无创动物肺功能仪 美国Buxco 公司 TBL450 型 正置荧光显微镜及成像系统 日本奥林巴斯公司 CX41-32 3.3. 其他（请具体写明） 实验动物要求准备：体重250-300g 成年豚鼠，雌雄不限，适应性饲养5～7d。 4. 实验步骤 (1) 致敏： 腹腔注射10%卵清蛋白生理盐水溶液1.0 ml （含卵清蛋白100 mg）使豚鼠处于致敏状 态。解螺旋/ (2) 激发： 注射卵清蛋白后2 周，将豚鼠置于密闭有机玻璃箱内，用0.5%-1%卵清蛋白生理盐水溶 液超声雾化吸入30s-2min，诱发豚鼠哮喘发作。 (3) 气道反应性检测： 通常在对组胺的气道反应性测定中，随着吸入组胺浓度的增加，模型动物气道内压也逐 渐升高；可使用无创动物肺功能仪检测Penh 值。设定间歇期为10 min，首先测定正常 状态下的Penh 值作为基线，依次雾化吸入递增浓度的乙酰甲胆碱，并记录Penh 的变化， 激发质量浓度依次为0，6.25，12.5，25，50，100 g/L，记录各质量浓度乙酰甲胆碱 激发下的平均Penh 值。将每个乙酰甲胆碱激发浓度下的Penh 值转换为与正常状态下 Penh 值的百分比(乙酰甲胆碱激发的Penh 值/基础Penh 值×100%)作为气道反应性的评 价指标。 (4) 肺组织病理学检测 取肺组织制成石蜡切片后行苏木精-伊红和碘酸-雪夫染色。正立显微成像系统下观察豚 鼠肺组织支气管周围炎性浸润情况，以及支气管腔杯状上皮黏液分泌情况。 通常支气管腔、肺泡腔内渗出会明显增多；支气管壁及支气管周围