克隆形成实验（细胞水平）.pdfVIP

解螺旋 陪伴医生科研成长 克隆形成实验 1．实验原理 当单个细胞在体外增殖6 代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克 隆含有50 以上的细胞，大小在0.3-1.0mm 之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各 种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆 形成能力进行检测。 细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖 和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依 赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大： 一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞 系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。以你可以通过细胞在平板上的克隆形成能力来 衡量细胞的成瘤能力。解螺旋/ 2．实验目的 通过细胞在平板上的克隆形成能力来衡量细胞的成瘤能力。 3．实验材料 3.1.主要试剂 试剂名称 来源 Cat.No. 血清 BI 04-001-1A 双抗 Hyclone SV30010 胰蛋白酶 Hyclone SH30042 结晶紫 Beyotime C0121 多聚甲醛 国药集团化学试剂有限公司 3.2 主要仪器 仪器名称 来源 型号 生物安全柜 苏净安泰 BSC-B000IIA2 二氧化碳培养箱 Thermo 311 1 解螺旋 陪伴医生科研成长 离心机 上海卢湘仪公司 TP25-ws 显微镜 Olympus CKX41 酶标仪 Epoch 波长595 nm 3.3 试剂配制 3.3.1 完全培养基配制 于基础培养基中，加入10%FBS,1%双抗，以及其他培养成分（个别细胞需要额外的营养 因子，请查看细胞库列表），轻轻混匀，4℃冰箱储存（以下简称培养基）。 3.3.2 D-Hanks 配制 成分 终浓度 NaCl 8 g/L KCl 0.4 g/L Na2HPO4·7H2O 0.1 g/L KH2PO4 0.06 g/L