简述PCR基本原理.docxVIP

一．  简述  PCR  基本原理？ PCR  技术的基本原理  类似于  DNA  的天然复制过程， 其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。  PCR  由 变性 --退火  --延伸三个基本反应步骤构成：①模板  DNA  的变 性：模板  DNA  经加热至  93℃左右一定时间后， 使模板  DNA 双链或经  PCR  扩增形成的双链  DNA  解离，使之成为单链， 以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板  DNA  与引 物的退火  (复性 )：模板  DNA  经加热变性成单链后，  温度降至 55℃左右，引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合；③ 引物的延伸： DNA 模板 --引物结合物在 TaqDNA 聚合酶的作 用下，以 dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与 半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保 留复制链重复循环变性 --退火 -- 延伸三过程， 就可获得更多的 “半保留复制链 ”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。 每完成一个循环需 2～4 分钟， 2～3 小时就能将待扩目的基 因扩增放大几百万倍。 二． 简述荧光定量 PCR 基本原理？ Ct 值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时 所经历的循环数。 荧光域值（ threshold ）：是