蛋白表达步骤.pptx

1．培养基的配制 原理 /link?url=B2SX0TUS5KB2ovXQcKyds9MS9OnW7y5Yn204CH3vg44Fs TWICJAnwePCb013a9T-vzmX5g9oCbv6GSuPahN6jfA9hVhQXCd3QCMZ_NTscu7 步骤 LB 培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌， 其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于 筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。尽管该培养基的名称被广泛解释为 Luria-Bertani 培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于 英语的 lysogeny broth，即溶菌肉汤。 LB 培养基的配制： 成分 胰蛋白胨(tryptone) 10g 酵母提取物(yeast extract) 5g 氯化钠(NaCl) 10g 固体培养基另加 琼脂粉 15-20g 加双蒸水至 1000mL, 用 5mol/L NaOH（约 0.2ml）调 pH 至 7.2，121℃灭菌 30min 配制方法 （1）称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯 中。 （2）溶化 加入所需水量 2/3 的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全 部溶化。 （3）调pH 用 1mol/L NaOH 溶液调pH 至 7.2。 （4）定容 将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。 （5）加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。 （6）分装、加塞、包扎。 （7）高压蒸汽灭菌 100Pa 灭菌 20min。;2、大肠杆菌菌种活化 原理 菌种的活化就是将处于保藏状态的菌种放入合适的培养基中进行培养，逐级 增大培养是为了得到纯而壮的培养物，可以理解为就是为了获得活力旺盛的、接 种数量足够的培养物进行培养。菌种发酵一般情况下需要 2-3 代的复壮过程，因 为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化,让菌种逐渐适应培养 环境 中药标准对照品研究中心建议实验要明白菌种活化的情况就首选需要了解 菌种保藏的方式和方法。目前国际和国内常用的菌种保存方法包括：定期移植法、 液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃ 冰箱冻结法、液氮超低温冻结 法。 对于不同的保存方式活化的方式也不同： 1 定期移植法的菌种复苏较简单，直接转接即可； 2 液体石蜡法保存的菌种在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基 上，生长繁殖后，再重新转接一次； 3 沙土管法保存菌种在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒 于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养 基中，增殖培养后再转接斜面； 4 真空冷冻干燥法保存菌种在复苏时先用 70%酒精棉花擦拭安瓿上部，将 安瓿管顶部烧热， 用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀 或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块， 使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养； 5 -80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管， 应立即放置 38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解 为止，约需 50 秒-100 秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养 基上进行培养 6 液氮超低温冻结法保存菌种复苏与-80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏相 似，从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在 38℃-40℃水浴中快速 复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需 50 秒-100 秒。开启安;3;4;5;6;7;8;9;10;11;12