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第三节 柯斯质粒 (cosmid) 一、柯斯质粒（ cosmid ）概述 1 、定义：是由 λ噬菌体 与 质粒 （ plasmid ）共同构 建而成的杂合载体。 2 、柯斯质粒 DNA: 另外还含有与 cos 位点相邻的控制包装作用的序列， 质粒中的抗性标记基因（如： AmpR ， TetR ），以 及酶切位点（EcoRⅠ、HindⅢ）。 λ 噬菌体的 cos 位点 : 使其可被包装蛋白识别包装； 质粒的复制起点：使其在宿主细胞中可自主复制。 因此该载体在体外重组后，可利用噬菌体体外 包装的特性进行体外 包装 ，利用噬菌体感染的方式 将重组 DNA 导入受体细胞。但它不会产生子代噬 菌体，而是以质粒 DNA 的形式存在于细胞内并自 我 复制 。 柯斯质粒（ cosmid ） cos 位点 cos site-carring plasmid 质粒 二、柯斯质粒载体的特点 1. 具有 λ 噬菌体的特性； 2. 具有质粒载体的特性； 3. 具有较高容量的克隆能力； 4. 具有与同源性序列的质粒进行重组的能力 柯斯质粒 pHC79 ：由 质粒 pBR322 和 λ 噬菌体的 cos 位点的一 段 DNA 构成 全长 4--6kb 三、实例 ★设计构建的柯斯质粒一般长 4 ～ 6kb 。 ★凡具有 cos 位点的任何 DNA 分子只要在 长度相当于噬菌体基因组，就可以同外壳 蛋白结合而被包装成类似噬菌体λ的颗粒。 因此，插入柯斯质粒的 外源 DNA 可 大于 40 kb ，一般 30 ～ 44.5 kb 。 ★重组的柯斯质粒可象λ噬菌体一样 感染 大肠杆菌，并在细菌细胞中 复制 。 Digestion Ligation C) Packaging and infect Formation of a cosmid clone Ligation to cleaved cosmid vector molecules can produce vector-target concatemers, resulting in a large exogenous DNA fragment flanked by cos sequences. 四、柯斯质粒作载体的优、缺点 1 、优点： 可携带外源基因大， 30 ～ 44.5 kb 。 ① 易发生自我重组： 载体自身只相当于可 以插入片段的 1/10 左右，因此往往会出现 载体同载体自身连接，结果在一个重组分 子内可有几个柯斯质粒载体连在一起。但 用碱性磷酸酶处理，可阻止载体分子自身 连接； 2 、缺点
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