酶分子化学修饰原因与应用.pptVIP

酶分子化学修饰原因和应用; 传统的生物催化剂都是设计或优化催化过程去适应已有的生物催化剂。 开始修饰或改造生物催化剂以适应特定的生物催化过程。希望能够实现先设计理想的催化过程，然后在寻找并改造得到理想的生物催化剂。 理想生物催化剂：有良好的实际应用灵活性、稳定性和可生产性。;一、酶分子修饰的原因 1． 稳定性不够，不能适应大量生产的需要。 2． 作用的最适条件不符（温度、pH等）。 3． 酶的主要动力学性质的不适应。 4． 临床应用的特殊要求。 消除抗原性、延长酶的半衰期、稳定性等;二、 酶修饰的方向;酶化学修饰的目的 1. 研究酶的结构与功能的关系。（50年代末） 2. 人为改变天然酶的某些性质，扩大酶的应用 范围。（70年代末之后） 1）提高酶的生物活性（酶活力）。 2）增强酶的稳定性（热稳定性、体内半衰期）。 3）消除抗原性（针对特异性反应降低生物识别能力）。 4）产生新的催化能力。;1、酶的结构基础 辅因子 催化基团 全酶 接触残基 活性部位 底物结合基团 必需残基 辅助残基 酶蛋白 结构残基 非贡献残基;?① 辅因子 FAD、FMN：脱氢酶、氧化酶的辅酶 NADH、NADPH：脱氢酶的辅酶 磷酸吡哆醛：转氨酶的辅基 Ca2+ ：?－淀粉酶金属离子辅因子： ?② 非贡献残基 木瓜蛋白酶 2/3，烯醇化酶 1/5 ;酶分子化学修饰原因和应用;③ 结构残基 结构残基在酶分子活性构象形成和稳定中起关键作用。 溶菌酶分子中有4对S－C键，分别在6-127,30-115,46-48,76-94位连接。实验证明这4对二硫键中，6-127位之间的键断裂，酶不失活。这表明酶分子中的S－S键并非全部为维持活性构象所必需。;酶分子化学修饰原因和应用;④ 催化基团（部位）是在催化反应中直接参与电子接受关系的部位。 牛胰凝乳蛋白???Ser195，His57，ASP120 枯草杆菌蛋白酶，Ser221, His64, ASP32;⑤ 底物结合部位：酶活性部位直接与其底物结合的残基构成的空间部位。 溶菌酶在水解细胞壁多糖的?－1,4糖苷键时，酶活性部位凹穴，能容纳6个六碳糖单位，即有六个结合亚位点，来识别这些糖单位。 ⑥ 辅助残基 黑曲霉产生淀粉酶 糖肽链有助于酶附着生淀粉;活性中心的重要化学基团 7种氨基酸出现的频率最高 Lys Asp Glu Cys His Tyr Ser 兰（赖）天果拌猪肉（酪）丝 某些功能基团,如（氨基、羧基、巯基、羟基 和咪唑基）是酶的必需基团。 赖氨酸的氨基 天冬氨酸和谷氨酸的羧基 半胱氨酸的巯基 组氨酸的咪唑基 酪氨酸和丝氨酸的羟基;四、 酶化学修饰的基本原理;3、如何维持酶功能结构的完整性与抗蛋白水解酶 酶化学修饰后通过两种途径抗蛋白水解酶： 大分子修饰剂产生空间障碍阻挡蛋白水解酶接近酶分子。“遮盖”酶分子上敏感键免遭破坏。 酶分子上许多敏感基团交联上修饰剂后，减少了受蛋白水解酶破坏的可能性。;4、如何消除酶的抗原性及稳定酶的微环境 酶蛋白氨基酸组成的抗原决定簇，与修饰剂形成了共价键。 破坏了抗原决定簇——抗原性降低乃至消除 “遮盖”了抗原决定簇——阻碍抗原、抗体结合 大分子修饰剂本身是多聚电荷体，能在酶分子表面形成“缓冲外壳”，抵御外界环境的极性变化，维持酶活性部位微环境相对稳定。;第一节 酶分子化学修饰;二、主要作用： 用于酶的结构和功能研究，探测酶的必需氨基酸残基的性质和数目，酶的构象变化和运动性，酶作用的化学机理。