桑树OSM及PLA1-ⅡDelta基因克隆及其在干旱胁迫下的功能研究.pdfVIP

摘要 摘要 桑树是我国重要的经济林木，因其含有较强的抗逆性而成为植物生态科学研究的 重要材料。桑树抗逆基因的筛选与研究可为桑树抗性育种提供基因资源。在已鉴定的 植物抗性基因中，渗调蛋白（osmotins，OSMs ）在植物遭受逆境胁迫时具有重要的调 节作用，但桑树OSM 的功能研究尚未见报道。磷脂酶（Phospholipases ）作为生物体 内负责生物合成和磷脂代谢的一类酶，其与植物的抗逆性也有密切联系。MaPLA1- Ⅱδ 基因是磷脂酶家族中重要的一类，其发现和研究起步较晚，桑树MaPLA1- Ⅱδ 的研究 尚未见报道。因此，桑树渗调蛋白与植物磷脂酶的进一步研究对促进桑树抗逆分子机 制研究具有重要意义。 本研究以生长45 d 的丰驰桑（Morus alba. ）幼苗为材料，克隆了桑树MaPLA1- Ⅱδ 的4 个成员以及桑树渗调蛋白基因MaOSM ，进行了基因的组织表达模式分析、干旱 应答胁迫分析，并将以上基因转化拟南芥，获得过表达拟南芥植株，并以野生型拟南 芥为对照，从表型、生理生化、基因表达等多个层面上进行了抗旱性分析，得到以下 结果： （1）MaOSM 及MaPLA1- Ⅱδ 基因家族中的各成员在桑树叶，芽，根，花中均有 表达，且均在根中有较高的表达量。ABA ，盐，寒冷及干旱胁迫均能诱导MaOSM 及 MaPLA1- Ⅱδ 各成员的表达，且均受干旱的强烈诱导。 （2 ）MaOSM 在根中有较高的表达水平，且对根毛的发育起到重要作用。通过生 理指标检测得出，MaOSM 表达量与过表达植株的抗旱性密切相关，且MaOSM 表达 量越高，抗旱能力越强。 （3 ）通过对转MaPLA1- Ⅱδ 拟南芥的形态分析得出，转MaPLA1- Ⅱδ 植株出现 提前抽薹现象。正常生长条件下，转MaPLA1- Ⅱδ 植株与野生型植株生长无明显差异， 但干旱条件下，MaPLA1- Ⅱδ 的过表达会提高植株种子的萌发率、促进幼苗生根，并 对促进植物体茎的伸长有正向调节的作用。 （4 ）生理指标的检测发现，MaPLA1- Ⅱδ 过表达植株含有更多的渗透调节物质脯 氨酸，来抵御干旱对细胞的伤害，且MaPLA1- Ⅱδ 基因的上调可降低植物细胞膜的损 伤程度，增加细胞原生质体稳定性，有效增强植株抗旱性。 （5 ）过表达MaPLA1- Ⅱδ 植株在干旱条件下会促使气孔关闭，减少水分损失。 分析植物体内抗氧化物质含量发现，过表达植株会提高抗氧化酶活性增强 ROS 的清 除能力，增强体内保护机制，加之气孔关闭会导致光合作用下降使得 ROS 生物合成 减少，从而减少植物体细胞的损伤程度，达到抗旱效果。 I 西北农林科技大学硕士学位论文 研究表明，桑树MaOSM 及MaPLA1- Ⅱδ 均为干旱应答基因，过表达后均可以提 高植株的抗旱性。桑树渗调蛋白可能通过上调渗透调节物质的含量来降低干旱胁迫对 细胞膜的损伤程度，从而提高植株在干旱胁迫下的耐受性。而桑树MaPLA1- Ⅱδ 蛋白 通过增强抗氧化酶的活性与调节气孔的开闭共同作用，从而提高转基因植株的抗旱能 力。 关键词: 桑树；渗调蛋白；磷脂酶；抗旱性 II 目 录 目 录 摘 要I ABSTRACT III 目 录 V 第一章 文献综述 1 1.1 逆境胁迫对植物生长的影响 1 1.1.1 水分胁迫 1 1.1.2 温度胁迫 2 1.1.3 盐碱胁迫 2 1.2.植物响应逆境胁迫的机制研究 2 1.2.1 干旱胁迫下植物的形态适应性 2 1.2.2 植物抗逆生理机制 3 1.3 植物渗调蛋白（Osmotin ，OSM ）研究进展 4