稳定细胞转染流程(刘文).docxVIP

e e p G 2 DMEM 配制： NaHCO 3 3.7g HEPES 4.766g DMEM 粉 1包 水 1000 ml 用 HEPES 调整 PH 值到 7.3 ，加入双抗（青霉素，链霉素，每 L 培养液各 10 万单位），无菌 过滤， 4 度保存。 0.25% 胰酶的配制： 1、 称胰酶粉末0.25 g,力口 100 U高压灭菌的1 x PBS。 2、 使用小过滤器无菌过滤灭菌， 4 度保存。 0.02% EDTA 的配制： 1、 称EDTA粉末0.02 g ,力口 100 k高压灭菌的1 x PBS。 2、 使用小过滤器无菌过滤灭菌， 4 度保存。 复苏细胞 1、准备好操纵台，吸管， 5 ml 玻璃离心管， 40度干净温水， （用烧杯装干净蒸馏水于水中 温热）。 2、于液氮冻存罐中取出细胞，立即置于温水中，并不停地摇动，让其速融。 3、 5 ml 玻璃离心管中加入 4ml 的完全培养液，再加入溶解的细胞液。 4、 1000rpm，5min 。 弃上清，加入 2 ml 培养液，吹散细胞。 5、分装于两瓶中，然后每瓶补充培养液至 5 ml 。培养箱中培养；每日观察细胞生长情况。 传代（附壁细胞） 1、 超净台消毒，试管消毒，注意切忌污染。 2、 胎牛血清（FBS）,培养液（DMEM :对附壁细胞） 胎牛血清10 ml加入DMEM/1640 （ 1 ： 10）。 3、 消