2019年SN出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法.docxVIP

出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法 SN0169-92 代替 ZBX09002— 88 Methodforexam in ati ono fcoliform , fecalcoliforma ndescherichiacoli in foodforexport 1、 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。 本标准适用于出口食品的检验。 2、 设备和材料 吸管：1mL 具 0.1mL刻度；5mL和 10mL 具 1mL刻度。 水浴箱：44.5 ± 0.5 C。 培养箱：36± 1C, 44.5 ± 0.5 C。 冰箱：0?5C和-15?-20 Co 均质器。 乳钵和研棒。 平皿：直径90mm 天平：感量0.1g o 显微镜。 2.10稀释瓶：100mL 200mL和 500mL三角烧瓶及广口瓶。 2.11玻璃珠：直径约5mm 2.12菌落计数器。 3、 培养基及试剂 3.1月桂基硫酸盐胰蛋白(胨)(LST)肉汤。 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。 3.3EC肉汤。 伊红美蓝琼脂(EMB)。 营养琼脂斜面 色氨酸肉汤。 3.7MR-VP培养基。 3.8Korser 氏枸椽酸盐肉汤。 结晶紫中性红胆盐琼脂 （VRBA）。 Butterfield 氏磷酸盐缓冲稀释液。 生理盐水。 革兰氏染色液。 3.13Kovacs 氏靛基质试剂。 3.14 甲基红指示剂。 3.15Voges-proskauer（V-P） 试剂。 4、样品制备 以无菌操作取有代表性的样品。 如有包装则用 75％乙醇在开口处擦拭后取样。 若 不能及时检验，应将冷冻样品置于-15 C保存；非冷冻而易腐的食品，应置于4C冰箱保存。 检验前冷冻样品可于2?5C 18h内解冻，或在45C以下15min内解冻。 不同食品样品匀液的制备 液体食品以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶（瓶内预置 适当数量的玻璃珠），以30cm幅度、于7s内振摇25次（或以机械振荡器振摇），制成1: 10的样品匀液。 固体和半固体食品 以无菌操作取25g样品，放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内，于8000r/min均质 1?2min，制成1： 10样品匀液（也可用灭菌乳钵研磨的方法代替）。 4.3 稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计，用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍 递增的样品稀释液，如10-2、10-3、10-4……。从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不得超 过 15min。 5、大肠菌群的测定 大肠菌群MPNS的测定 对每个样品， 选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。 每个稀释度接种三管月桂 基硫酸盐胰蛋白（月示）（LST）肉汤，每管接种1mL 将接种管置于36 ± 1C培养48 土 2h。 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生，记录在 24h和48h内产气的 LST肉汤管数。如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则 进一步作证实试验。 大肠菌群的证实试验 将所有产气管用直径为3mm勺接种环移种到煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中。 置 BGLB肉汤管于 36 ±「C培养 48± 2h。 记录所有BGLB肉汤管的产气管数。 结果报告：按BGLB肉汤产气管数，查MPN表［见附录B（补充件）］报告每克（毫升） 样品中大肠菌群的MPN值。 6、粪大肠菌群测定 6.1用直径为3mm勺接种环将所有48土2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。 将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5 ± 0.5 C水浴箱内，培养24± 2h。 水浴箱的水平面应高于肉汤培养基液面。 应以已知为44.5 C产气阳性的大肠杆菌和44.5 C 不产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性和阴性对照。 记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群试验阳性；不产气管为粪大肠菌群 试验阴性。 结果报告：按产气管数，查 MPN表报告每克（毫升）样品中粪大肠菌群的MPNB。 靛基质 MR VP 枸椽酸盐 鉴定（型别） + + 一 一 典型大肠杆菌 一 + 一 一 非典型大肠杆菌 + + 一 + 典型中间型 一 + 一 + 非典型中间型 一 一 + + 典型产气肠杆菌 + 一 + + 非典型产气肠杆菌 7、大肠杆菌测定 将6.3条中的EC肉汤管继续培养24h，取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝（EMB） 平板，36 ± 1C培养24± 2h。 7.2检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落 如有典型菌落，则从每个平板上至少挑取 2 个典型菌落；如无典型菌落，则从每个平 板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位，移种到营养琼脂斜面上，36 ±「C 培养18?24h。 将斜面培养物移种到下列