组蛋白去乙酰化酶冗余调控脂肪生成.docx

去乙酰化酶冗余调控脂肪生成 脂肪细胞分化是在转录激活子和抑制子调控下的确定过程。 显示组蛋白去乙酰化酶 (HDAC ) 抑制剂在体外有效阻碍脂肪细胞分化。这个作用对脂肪生成是特异的，而间充质分化过程， 成纤维细胞生成被 HDAC 的抑制作用而增强。 尽管敲除培养的间充质祖细胞 HDAC 基因系 统基因组，显示 HDAC1 和 HDAC2 其爱哦出导致脂质积累减少，揭示 I 类 HDACs 在脂肪 生成中具有冗余和必要作用。这个发现揭开之前 HDACs 在调控脂肪生成未知的作用。 人类未利用的能力导致过度剩余能量摄取转化成甘油三酯，并以脂滴储存以备以后利 用。理论上， 脂滴脂肪量在增生和肥大时均会增加。 已经证明脂肪细胞数量是早期最初决定， 以后脂肪量的变化是通过增加脂肪细胞容积。然而，脂肪细胞大约每年更新 10%。促使成 年人脂肪组织更新的分子机制还没有完全了解， 但是推测与细胞死亡和由间充质前体细胞来 源的前体脂肪生成有关，对于在幼儿早期维持脂肪细胞数量前体大小是有关的。 脂肪生成是一个紧密连接的过程， 间充质前体细胞分化成成熟脂肪细胞， 表达一系列生 物合成，转运和储存的酶。这个过程是具有级联特征的转录因子包括 C/EBP 3 ,SREBPs,PPAR 丫。培养细胞研究显示脂肪生成核心转录因子与组氨酸去乙酰化酶相互作用， 通过乙酰化核 小体组氨酸乙酰化刺激转录，因此释放染色体结构。组氨酸去乙酰化酶( HDACs )是染色 体修饰酶家族保守酶，通过对核小体组氨酸去乙酰化抑制转录，与脂肪生成转录因子有关， 抵抗组氨酸去乙酰化酶功能。因此，脂肪细胞分化经典模型， HDACs 被认为是通过直接抑 制前体脂肪细胞转录因子转录活性抑制脂肪生成过程。 HDACs有五个家族成员，显示不同表达，调控，底物偏好模式。 I型 HDACs (HDAC1,2,3,8 )的组织表达范围很广，有效的对组氨酸去乙酰化。相反，n a型HDACs (HDAC4,5,7,9 )在肌肉和神经组织有限表达，包括一个歧化区域，具有最小的催化活性， 对转录抑制不是必须的。 n b Hdacs ( HDAC6,10 )是主要细胞膜去乙酰化酶， 而川型HDACs 也被称为sirtuins，主要的核物质，NAD是其底物。I型 HDACs的活性能够被药理学抑制 剂有效抑制，而这种抑制在人体具有耐受性。考虑到这些，显示 HDAC 抑制剂组织病理心 肌生长和重塑以响应各种刺激。 现在， FDA 证明 HDAC 用淋巴 T 细胞处理后抑制子 SAHA 。 进行其他临床试验检测不同 HDAC 抑制子作为抗癌因子的有效性。 HDAC 抑制子也增强痴 呆动物模型长期记忆，改善神经变性疾病的若干症状。显著地，据报道 HDAC 抑制能够增 强低等真核生物生命周期。体内介导 HDAC 抑制活性准确的机制和分子靶点还不需要进一 步去定义，在这一领域有一个主要的组织。 研究不同 HDAC 亚基在发育中的作用，发现敲除 HDAC3 导致肝脏和心脏深厚的前体 脂肪细胞表型，预示 HDAC 在脂肪生成中具有抑制作用。这个提示我们在这个过程中研究 不同 HDAC 亚基。显示体外药理学 HDAC 抑制严重抑制体外脂肪生成。在间充质干细胞遗 传上敲除I型HDACs，证明HDAC1和2在脂肪生成中作为正调控子具有冗余作用。 试验操作 细胞培养和脂肪细胞分化。 3T3-L1 细胞培养在加入 10%FCS 和抗生素的 DMEM 培养基 中。小鼠胚胎成纤维细胞取自胚胎期( E) 12.5 天的胚胎细胞，培养在含有 10%的 FBS 和抗 生素的培养基中。 用如前所述的方法进行慢病毒转染小鼠胚胎成纤维细胞。简要的， 293T 细胞培养在加 油10%FBS和抗生素的 DMEM 培养基中。用 FuGENE将细胞转染 GFP-CRE或GFP-敲除 CRE融合载体。转染12h后，细胞用新鲜培养基培养。 36h过培养后，收集含有慢病毒的培 养基， 加入聚凝氨(4ug/ml),滤过并转移到靶细胞。 最初， 卢盖前体成骨细胞如前所述分离。 简要的， 鼠类前体成骨细胞分离自 1.5 天小仔， 在含有 10%的 FBS 的 DMEM 培养基。达到汇合后，前体成骨细胞用抗坏血酸， 10mM 3 - 甘油磷酸盐和 10nM 地塞米松诱导分化 14 天。钙化基体储存在成熟成骨细胞中，用硝酸盐 固定后河只管的看到。简要的，细胞在 10%的福尔马林固定 10min ，用 5%的硝酸银着色， 用 5%硫代硫酸钠再固定 5min 。 诱导 3T3-L1 和小鼠胚胎成纤维细胞成脂和脂质积累， 细胞培养到汇合， 48h 后于 1,72uM 胰岛素， 625nM 地塞米松， 2uM 罗格列酮，异丁甲基黄嘌呤共培养 2 天。细胞培养基只加 入 1.72uM