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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、 筛选菌株 1筛选微生物的原理：人为提供有利于 生长的条件 （包括 、温度、 等），同时 或 其他种类微生物生长的培养基。 2、 选择培养基：允许 的微生物生 长，同时 或 其他种类微生物生长 的培养基，称作选择培养基。 3、 欲得到分离分解尿素的细菌可以用以 唯一氮源 TOC \o 1-5 \h \z 的培养基进行选择培养，因为该细菌可以产生 ，将 尿素分解成 ，使培养基的 PH ，所以若作进一步的鉴定可向该培养基长加 入 0 二、 统计菌落数目 1、 微生物活菌计数的常用方法是 ，其 原理是：当样品的稀释度足够 时，培养基 表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。利用 公式： 进行计算。（ C 代表某一稀释度下平板 上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积， M代表稀释 倍数） 2、 为了确保结果准确，一般选择菌落数在 的平 板进行计数，每个稀释度下至少涂布 个平板，取菌落 数的 ，且这三个平板的菌落数 差异过大，3、用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数 目 ，因 为 ，因此统计结果 一般用 数而不是活菌数来表示。 4、 也是测定微生物数量的常用方 法。 三、 设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验 结果的影响，提高实验结果的 0 四、 实验设计 1土壤取样：细菌适宜在酸碱度接近 的 土壤中生长，绝大多数细菌在距地表约 的土壤 2、 样品稀释：测定土壤中细菌的数量，一般选用 二 、 的稀释液进行平板培养； 测定放线菌的数 量，一般选用 、 、 的稀释液进行平板 培养；测定真菌的数量，一般选用 、 、 的稀释液进行平板培养。 3、 微生物的培养与观察：细菌一般在 的温度下培养 ；放线菌一般在 的温度下培 养 ;真菌一般在 的温度下培 养 。 4、 菌落的特征包括菌落的 、 、 和 等方面。 五、操作提示 无菌操作：取土样的小铲子和盛土样的信封使用前都需 要 ;应在 取土样；在土壤 稀释过程中，每一步都要在 操作。 练习题 分离土壤中分解尿素的细菌 ，对培养基的要求是（ ）。 ①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐 ①③⑤⑦ B.②④⑥⑧ C.①③⑤⑧D.①④⑥⑦ 下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析 正确的是 A. 3号试管中的菌落稀释倍数为 103倍 4号中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为 5号的10倍 5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1.7 X 109个 该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高 可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是 A ?以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 B .以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂 初唯一的已知胃部细菌. 初唯一的已知胃部细菌. Hp可产生高活性的尿素酶. C .以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹川试剂 D ?以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂 在农田土壤的表层自生固氮菌较多，用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上 培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是 ①加抗生素 ②不加抗生素 ③加氮素④不加氮素 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦37C恒温箱中培养 ⑧28?30C温度下培养 A.①③⑤⑦ A.①③⑤⑦ B.②④⑥⑧ C .②④⑤⑧ D .①④⑥⑦ 从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的 将土壤用无菌水稀释，制备 10「5?10「3 土壤稀释液 将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上 用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌 从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株 关于对分解尿素的细菌进行分离、计数的实验叙述，错误的是 统计菌落数目时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落，来源于样品 稀释液中的一个活菌。 统计菌落数目时，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。 设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰 以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，通过检测培养基的 pH的变化，还 不能准确鉴定培养基中的细菌就是能够分解尿素的那种。 下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是 （） ①土壤取样 ②称取10g 土壤取出加入盛有 90mL无菌水的锥形瓶中 ③吸取O.ImL进行平板涂布 ④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释 度 A.①t②t③t④ B .①t③t②t④ C .①t②t④t③ D .①t④t②t③ 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 （） A. A .