酶催化反应动力学理论与应用.pptVIP

酶催化反应动力学理论和应用;1. 酶催化作用特性;酶的催化作用可使反应速度提高107 -1013倍。极少量酶就可催化大量反应物发生转变。 例如： 2H2O2 2H2O + O2 用Fe+催化， 1mol铁离子可催化10-5mol双氧水分解。在相同条件下，1mol过氧化氢酶却可催化5×105mol的双氧水分解。 用?-淀粉酶催化淀粉水解，1克结晶酶在65?C条件下可催化2吨淀粉水解。;;又称为特异性，是指酶在催化生化反应时对底物的选择性. 一种酶只能催化一种或一类化合物或化学键，进行一定的化学反应，产生一定的产物，称 Specificity. 如，蛋白酶只能催化蛋白质的水解，酯酶只催化酯类的水解，而淀粉酶只能催化淀粉的水解。若用一般催化剂，对作用物的要求就不那么严格，以上三类物质都可以在酸或碱的催化下水解。;绝对专一性;;相对特异性;;;立体异构专一性;酶作用专一性机理; 诱导契合学说(induced-fit hypothesis)：酶的活性中心在结构上具柔性，底物接近活性中心时，可诱导酶蛋白构象发生变化，这样就使酶活性中心有关基团正确排列和定向，使之与底物成互补形状有机的结合而催化反应进行。;常温、常压、pH=7 酶促反应一般在pH 5-8 水溶液中进行，反应温度范围为20-40?C。 高温或其它苛刻的物理或化学条件，将引起酶的失活。 ;D.酶活力可调节控制;研究各种因素对酶促反应速度的影响，对阐明酶作用的机理和建立酶的定量方法都是重要的。 影响因素包括有 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。;单底物、单产物反应 酶促反应速度用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示 反应速度取其初速度(指酶促反应开始时的速度) ，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度。只有初速度才与酶浓度成正比，而且反应产物及其他因素对酶促反应速度的影响也最小。;;酶催化反应动力学理论和应用; ;E + S ES P + E;1913年Michaelis和Menten根据酶促反应的中间络合物学说，推导出一个数学方程式，用来表示底物浓度与酶反应速度之间的量化关系，即米－曼氏方程式，简称米氏方程(Michaelis equation)。;;米氏方程式推导基于三点假说;米氏常数是反应速度为最大值一半时的底物浓度。因此，米氏常数的单位为mol/L。;Km值对于特定的反应条件而言是一个特征常数。只与酶的性质，酶所催化的底物和酶促反应条件(如温度、pH、有无抑制剂等)有关，与酶的浓度无关。不同的酶，具有不同的Km值。不同条件下具有不同的Km值。多底物酶，它对每一个底物都有一个Km。 Km值小的底物为该酶的最适底物。 Km值可以判断酶的专一性和天然底物。 ;Km在实际应用中的作用;;⑶Ｋm值与Ｖmax值的测定;An Eadie-Hofstee plot 将双倒数形式方程两边同乘 V·Vmax，整理可得;1、当酶促反应进行的速率为Vmax的80%时，Km和[S]之间有何关系？ 2、由酶反应S P测得下列数据 [S]/mol/L v/nmol ? L-1? min-1 6.25?10-6 15.0 7.50?10-5 56.25 1.00 ?10-4 60.0 1.00 ?10-3 74.9 1.00 ?10-2 75.0 1）计算Km和Vmax 2）当[S]= 5.0?10-5 mol/L 时，酶催化反应的速率是多少？;2.2 温度对酶促反应速度的影响;其二是由于酶的本质是蛋白质，因此随着温度逐渐升高，酶蛋白会因逐渐变性而失活，从而导致酶促化学反应速度下降。 酶所表现的最适温度是上述两种影响综合作用的结果。; 在较低的温度范围内，酶催化反应速率会随着温度的升高而加快，超过某一温度，即酶被加热到生理允许温度以上时，酶的反应速率反而随着温度的升高而下降。;只有在某一温度条件下，酶促化学反应速度达到最大值，通常把这个温度称为酶促化学反应的最适温度(optimum temperature)。 在一定条件下每种酶都有其催化反应的最适温度。;最适温度不是酶的特征物理常数，相反它常常受到其他各种条件如底物种类、作用时间、pH和离子强度等因素影响。如最适温度随酶促反应进行时间的长短而改变，这是因为温度使酶蛋白发生变性效应是随时间而逐步累加的。 一般而言，酶促反应进行时间长时酶的最适温度低，酶促反应进行时间短则最适温度高，所以只有在规定的酶促反应时间内才可确定酶的最适温度。;酶在固体状态下比在溶液中对温度的耐受力更高。酶的冰冻干粉制剂通常在冰箱中可存放几个月以上，而酶溶液一般