2021毛细管电泳和毛细管电色谱.ppt

毛细管电泳和毛细管电色谱 capillary electrophoresis 七个实验中选取一个实验，认真写一个完整的实验报告（包 括实验目的、实验原理、实验结果及相关结论等），在 5 月 31 日前交到 206 （曾力希）或 824 （蔡波太）办公室。 电泳 ? electrophoresis ? 是指溶液中带电粒子在电场 作用下发生迁移的电动现象。 毛细管电泳 ? capillary electrophoresis ? 是利用被 分析离子在电场作用下移动的速率不同而达到分离的 目的，这种技术主要用来分析在毛细管缓冲溶液中能 离解为离子的物质。 概 念 毛细管电泳 是一类以高压直流电场为驱动力，毛细管为分离 通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为的差异而实现分 离的新型液相分离分析技术。 毛细管电泳 是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大进 展，它使分析科学从微升水平得以进入 纳升 水平，并使单细胞 分析成为可能。 毛细管电色谱 （ capillary electrochromatography; CEC ）是 毛细管电泳与液相色谱相结合形成的一种高效、快速微分 离分析技术。 优点 : 操作简单，试样量少，分离效率高，成本低等。 在迁移时间上的重现性，进样的准确性和检测灵敏度方面 比高效液相色谱法稍逊。 毛细管电色谱 可以分离离子和中性分子。它是利用 缓冲溶液的电渗流作为泵，使被分析的分子通过对其 具有不同保留程度的第二相，达到分离的目的。 21.1 ． 毛细管电泳和毛细管电色谱的基本理论 21.1.1 ． 双电层和 Zeta 电势 21.1.2 ． 电泳 在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同的速度 或速率向其所带电荷相反电场方向迁移的现象叫作电泳。阴 离子向正极方向迁移，阳离子向负极方向迁移，中性化合物 不带电荷，不发生电泳运动。 在充满自由溶液开口管中球形粒子的电泳速率公式为： 电泳淌度（ μ ep ) 定义为单位场强下离子的平均电泳速率， 即 E v e ep ?? ?? 6 ? E v ep ep ? ? 在电泳过程中还存在另一种电动现象，即电渗。当高电压通 过含有缓冲溶液的毛细管柱时，体相溶液整体朝向一个方向 运动，产生电渗流。在柱内层氧化硅与溶质的界面上形成双 电层是电渗流产生的原因。 。 在典型的毛细管电泳分离中，若有电渗存在，离子的洗脱 顺序是 : 首先是最快的阳离子，紧接着是依次减慢的阳离 子，然后是全部的中性分子在一个区域出现，最后是最慢 的阴离子，紧接着的是依次加快的阴离子 。 21.1.3 ． 电渗流 21.1.3 ． 电渗流 以电场力驱动产生的溶液电渗流，与高效液相色谱中由高 压泵产生的液体流型不同： 电渗是 CE 的基本现象之一，它可以控制组分的迁移速率和 方向，进而影响 CE 的分离效率和重现性，所以电渗流控制 是 CE 中的关键问题或技术之一。 21.1.4. 电渗流的控制 影响电渗流的因素很多，直接影响因素有： 1. 电场强度 2. 温度 3. pH 值 4. 缓冲液溶剂 5. 离子强度 6. 添加剂 7. 管壁涂层 21.1.5. 分离原理 电泳和电渗流并存，在不考虑相互作用的前提下，粒子在 毛细管内电介质中的迁移速率是两种速率的矢量和： 在典型的毛细管电泳分离中，溶质的分离基于溶质间电泳 速率的差异。电渗流的速率绝对值一般大于粒子的电泳速率， 并有效地成为毛细管电泳的驱动力。溶质从毛细管的正极端 进样，带正电的粒子最先流出，中性粒子次之，带负电的粒 子在中性粒子之后流出。溶质依次通过检测器，得到与色谱 图极为相似的电泳分离图谱。 E u u u eo p e eo ep ) ( ? ? ? ? ? ? 21.1.5. 分离原理 毛细管电色谱由于引入了色谱机制，其保留机理包括两个 方面 : 其一，如同 HPLC ，基于溶质在固定相和流动间分配过程； 其二，如同 CE ，基于溶质电迁移过程。 由于 CEC 既能分离电中性溶质，又能分离带电溶质，对 复杂的混合样品显示出强大的分离潜力。 21.2. 毛细管电泳和电色谱仪器装置 21.2.1. 仪器基本结构 一般在一根长 40 ~ 100 cm, 内径 10 ~ 100 ? m 的毛 细管柱中充入缓冲溶液，柱的两端置于两个缓冲池 中。在两个缓冲池之间的毛细管接有两个铂电极。 试样从一端进入，而检测器则在另一端。使用的高 电压可以反相，以能分析阴离子。 21.2.2. 进样系统 毛细管分离通道十分细小，整个柱体积一般只有 4~5 μL ， 所需的样品区带只有 几纳升 。 毛细管电泳的进样方式一般是将毛细管的一端从缓冲液移 出，放入试样瓶中，使毛细管直接与样品接触，然后由重力、 电场力或其他动力来驱动样品