人体组织与胚胎 人体组织与胚胎 显微镜.docxVIP

组织学与胚胎学山东医学高等专科学校 组织学与胚胎学 山东医学高等专科学校 PAGE 1 组织学的研究技术 在组织学研究中，由于观察的结构都很微小，必须借助于光学显微镜(简称光镜)或电子显微镜(简称电镜)才能看到。通常把光学显微镜下所看见的结构称为光镜结构；电子显微镜下所看见的结构称为超微结构。显微镜下常用的长度单位有毫米(mm)、微米(μm)、纳米(nm)三种。 1mm=103μm=106nm 10-3mm=1μm=103nm 10-6mm 组织学的研究技术很多，这里仅简单地介绍几种常用的技术。  一般光镜技术 用光镜研究人体的形态结构，必须把要研究的材料制成很薄、能透光的切片。首先需要把切取的新鲜组织块置于甲醛等适当的固定液中固定，以防止组织的腐败和细胞自溶，使其尽可能保持生活时的形态。然后把组织块包埋在石蜡或火棉胶等包埋剂中，用切片机切成厚约5～8μm的组织切片。切片经染色等处理后，即可在镜下观察了。 光学显微镜 石蜡切片、苏木素-伊红染色步骤 组织块也可用液氮、干冰等迅速冻结，用冰冻切片机或恒冷箱切片机制成冷冻切片，经染色后在镜下观察。此法制片速度快，能保存组织中的脂类成分和酶的活性。疏松结缔组织可撕成薄片铺在载玻片上(铺片法)，血液可直接涂在载玻片上(涂片法)，骨可以磨成薄片(磨片法)，经染色后在镜下观察。 涂　片 铺　片 磨　片 组织切片染色的目的是使组织内不同的结构染上不同的颜色，以增加各结构间的对比度，使其更加清晰，易于在镜下分辨。染色的方法很多，最常用的方法是苏木精和伊红染色，简称HE染色。苏木精是碱性染料，能把细胞核染成紫兰色；伊红是酸性染料，通常把细胞质及非细胞成分染成红色。组织成分对碱性染料亲合力强者，称为嗜碱性，对酸性染料亲合力强者，称为嗜酸性，对碱性染料和酸性染料亲合力都不强者，称为中性。另外，还常用硝酸银浸染法显示组织的某些结构。有些结构用硝酸银浸染后，可直接使硝酸银还原而呈现棕黑色，称为亲银性；有些结构本身不能使硝酸银还原，需另加还原剂才能将硝酸银还原而呈棕黑色，称为嗜银性。 嗜碱性 嗜酸性 嗜碱性 嗜酸性 中性 嗜银性 神经元 电镜技术 （一） 透射电镜技术 透射电镜的成象与光镜不同，它利用电子流代替普通的光线，用磁场或电场代替玻璃透镜进行聚集和放大，并将影象投射到荧光屏上进行观察或摄片。透射电镜的标本制作也要经过固定、包埋、切片和染色等步骤，但每个步骤的要求都更加严格。通常将切取的新鲜小组织块(1mm3)用戊二醛和饿酸固定，环氧树脂包埋，在超薄切片机上切成厚约50～80nm的切片，再用醋酸铀和柠檬酸铅等重金属盐进行电子染色，以增加组织结构间的黑白反差。切片中被重金属盐所浸染而呈现深黑色的结构，称为电子密度高，呈浅色的结构，称电子密度低，这种染色称正染色。若被检结构本身不着色，其周围的结构被染成黑色，称负染色。 电子密度低 电子密度低 电子密度高 透射电子显微镜 （二）扫描电镜技术 扫描电镜用于观察细胞或组织的表面形态。样品制备简单，组织固定后不用包埋和切片，只 需置于真空镀膜仪内干燥，再将组织表面先后喷镀一层碳膜和合金膜，就可放在扫描电镜下，荧光屏上电子扫描显影和摄片了。扫描电镜的景深长，图象反差大而清晰，富有立体感。 微绒毛纤毛 微绒毛 纤毛 扫描电镜 扫描电镜图 组织化学和细胞化学技术 本技术是利用某些化学试剂与细胞内的某些物质发生化学反应或物理反应，在反应的部位形成有色的终末产物，然后置于显微镜下观察。此法可对组织或细胞内的某种物质进行定性、定位和定量的研究。 1．糖类 过碘酸雪夫反应(简称PAS反应)是显示细胞内多糖的一种方法。其化学反应的基本过程是：多糖经过碘酸(HIO4)的氧化，形成二醛，二醛再用无色的品红硫酸复合物(Schiff剂)处理，醛基与品红结合，于多糖存在的部位形成紫红色的沉淀物，从而证明该处有糖原或粘多糖的成分。颜色反应的深浅取决于组织内多糖的乙二醇分子的多寡。 PAS反应阳性细胞 2．脂类 脂类物质包括脂肪和类脂。标本用甲醛固定，冷冻切片，脂类保存较好。多用苏丹染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。也可用四氧化锇（OSO4）染色，脂肪酸或胆碱可使OSO4还原为OSO2而呈黑色。 3．酶 细胞内的酶种类甚多，有氧化还原酶、水解