水产微生物 实训八 显微镜（油镜）的使用 技能实训 显微镜使用技术.doc

技能实训 普通光学显微镜的使用 显微镜是进行微生物科学研究的重要工具，是微生物工作者必须掌握的实验基本功。显微镜通常包括普通光学显微镜、紫外显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。进行微生物形态观察，我们通常使用普通光学显微镜。 1. 普通光学显微镜的构造（图3-27） （1）机械部分 ① 镜座 显微镜的基座，用以支撑整个显微镜。 ② 镜臂 握持显微镜的把手，并支撑镜筒。 ③ 镜筒 连接接目镜和接物镜，是光线通过的通道。 ④ 物镜转换器 是具有螺旋口的金属圆盘，位于镜筒的下方，可以接多个目镜，通过它的转动，可将不同放大倍数的接物镜与接目镜连接构成一个放大系统。 图3-27 显微镜结构图⑤ 载物台 图3-27 显微镜结构图 ⑥ 调节螺旋 位于镜臂下部的两侧，分为粗调节螺旋和细调节螺旋，可通过调节载物台或镜筒的升降来改变物镜与标本之间的距离。一般粗调节螺旋为外圈直径大的，调节幅度较大；而细调节螺旋为内圈直径小的，调节幅度甚微。 ⑦ 次台 位于载物台下，装有聚光器和光圈，能上、下移动。 （2）光学部分 ① 采光系统 传统的普通显微镜一般由反光镜作为采光系统，通过它将外界的光线反射到聚光器透镜上，穿过透镜照明标本。目前也有许多由电光源代替反光镜，直接提供照明标本的光线。通常电光源还具有能调节光线强弱的电源旋钮。 ② 光圈 位于聚光器下方，推动光圈把手，可开大或缩小光圈，用以调节射入聚光器光线的多少。 ③ 聚光器 可将进入透镜的光线聚为一束，投射到标本上。可以上、下移动来调整光线的明暗。 ④ 接物镜 安装在物镜转换器的螺口上，通常根据放大的倍数分为低倍镜（4×～10×）、高倍镜（40×）和油镜（100×）。使用时可通过镜头侧面刻有的放大倍数来辨认。 ⑤ 接目镜 安装在镜筒上方。通常有5×、10×和15×等放大倍数的接目镜可供选择使用。为了便于指示物像，有的接目镜中还装有黑色细丝作为指针。 2.普通光学显微镜的使用方法 （1）显微镜的安置 显微镜置于平整的实验台上，镜座距实验台边缘3～4cm，调整座位高度以便于操作。 （2）选择接物镜放大倍数 在接目镜保持不变的情况下，进行显微观察时一般遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序，因为低倍数物镜视野相对大，易发现目标及确定检查的位置。转动物镜转换器，将低倍物镜（10×）转到中央适宜位置上，对准载物台中央孔，使光线能通过镜筒进入接目镜。 （3）采光及光源调节 使用电光源显微镜，应当先将光源亮度调至最小，然后接通电源，并根据需要调整光源亮度。而使用反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用接物镜的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。 （4）接目镜的调节 如果使用双筒显微镜，则应当调节两个接目镜之间的距离，直到双眼看到单一圆形视野。双筒显微镜左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的不同观察者。 （5）放置标本 将标本载玻片用弹簧夹固定，从侧面观察，调节标本移动器上的螺旋，使光线通过标本。 （6）低倍镜观察 转动粗调节螺旋，上升载物台或下降镜筒，使低倍物镜接近标本，用粗调节螺旋慢慢升起镜筒或下降载物台，使标本在视野中初步聚焦出现图像，再使用细调节螺旋调节至图像清晰。通过标本移动器慢慢移动玻片标本，认真观察标本各部位，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。在任何时候使用粗调节螺旋聚焦物像时，必需先从侧面注视，小心调节物镜靠近标本，然后用接目镜观察，慢慢调节接物镜离开标本进行聚焦，以免损坏镜头及玻片。 （7）高倍镜观察 在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节螺旋使物像清晰，利用标本移动器移动标本，仔细观察并绘图记录所观察到的结果。 在一般情况下，当物像在一种接物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其它物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的接物镜时仅用细调节螺旋即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节螺旋时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 （8）油镜观察 在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，将要观察的目的物移到视野中央，用物镜转换器将物镜镜头转至呈“八”字形，使载玻片上方出现可滴加香柏油的空间，在待观察的样品区域滴加香柏油，然后将油镜转到工作位置，这时油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。同时，将聚光器升至最高位置并开足光圈。调节照明使视野的亮度合适，再用细调节螺旋微调直至视野中出现清晰物像为止。仔