土壤中分解尿素的细菌的分离与计数677.docx

普通高中课程标准实验教科书一一生物选修 1 ［人教版］ 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 ★课题目标 ＜一）知识与技能 利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数 ＜二）过程与方法 分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性 ＜三）情感、态度与价值观 形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯 ★课题重点 对土样的选取和选择培养基的配制 ★课题难点 对分解尿素的细菌的计数 ★教案方法 启发式教案 ★教案工具 多媒体课件 ★教案过程 ＜一）引入新课 上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。下面我们来学习如何进行细菌的分 离，获得所需要的目的微生物。 V二）进行新课 1基础知识 1尿素是一种重要的氮肥，农作物不能 ＜能，不能）直接吸收利用，而是首先通过 土壤中的细菌将尿素分解为 氨和CO?,这是因为细菌能合成 脲酶。 2科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为 热泉的高温条件淘汰了绝大多数微 生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是 人为提供有利于目的菌株生长的条件 ＜包括营养、温度、 PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长 。 点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。所以通过配制选择培养基、控 制培养条件等选择目的微生物。 〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是 葡萄糖，提供氮源的的 是尿素，琼脂的作用是凝固剂。 〖思考2〗该培养基对微生物 具有 ＜具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机 制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长 。 3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是 稀释涂布平板法 。除 此之外，显微镜直接计数 也是测定微生物数量的常用方法。 【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。 公式：观察到的红细胞平均数：观察到的细菌平均数=红细胞含量：细菌含量 4采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于 样品 稀释液中一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30?300的平板进行计数。 〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是 ＜ 平均菌落数 十涂布的稀释液体积）X稀释倍数 。 〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是 恰当的稀释度。 〖思考5〗第—位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是 误，需重新实验。 5统计的菌落数比活菌的实际数目 低。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平 板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用 菌落数来表示。 6设置对照的主要目的是排 果的可信度。 7对照实验是指除了 被测试 的条件外，其他条件都 相同的实验。满足该条件的称 为对照组，未满足该条件的称为 实验组。 〖思考6〗请设计本实验的对照实验组： 方案1:其他同学用 A同学的土样进行实验。 方案2: A同学以不接种的培养基作为空白对照。 2 ?实验设计 1实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。 2. 2根据图示2-7填写以下实验流程: 配制土壤溶液 ―? 系列稀释 涂布平板与培养 —? 菌落计数 3 土壤微生物主要分布在距地表 3?8cm的近中性土壤中，约 70%?80%为细菌。 4分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同彳 其目的是保证获得菌落数在 30?300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为 104、105、 106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。 5培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在 30?37 C培养1?2d,放线 菌一般在25?28C培养5?7d,霉菌一般在 25?28C的温度下培养 3?4d。 6在菌落计数时，每隔 24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结 果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌 体都能形成肉眼可观察到的菌落。 7菌落的特征包括 形状、大小、隆起程度、颜色 等方面。 〖思考8〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？ 土壤中营养物质含量丰 富，环境条件适宜等。 9实验过程 1） 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。— 2） 应在火焰旁称取土壤_!0_g。将称好的土样倒入盛有 90mL无菌水的锥形瓶中，塞好 棉塞。 3） 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。 4） 实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 5） 为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。 〖思考9〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，