基因的表达机理.ppt

包涵体的形成 ①折叠状态的蛋白聚集作用 高表达导致水难溶的折叠态蛋白分子间相互作 用而聚在一起 ②非折叠态的蛋白聚集作用 在较高培养温度的细菌中，热稳定性差的蛋白 处于非折叠态，以二硫键等结合在一起 ③蛋白折叠中间体的聚集作用 由于折叠中间体的难溶而聚在一起 包涵体表达的优缺点 包涵体表达的优点： 简化外源表达蛋白的分离 保持表达产物结构稳定 包涵体表达的缺点： 表达的外源蛋白丧失了原有生物活性，必须经过 有效的 变性、复性 操作，才能得到具有正确空间 构想的活性蛋白体 融合蛋白 外源蛋白基因与受体菌蛋白基因重组，不改变两 个基因的阅读框，表达的蛋白为 融合蛋白 Gene Protein A B A B N C 融合蛋白的优点： 在自身蛋白引导下，形成良好的 杂合构象 ，可很 大程度封闭蛋白水解酶切割位点 某些情况下，具有水溶性和一定生物活性 易于分离纯化 寡聚型外源蛋白 低拷贝质粒，多基因串联排列。目的蛋白高表达， 非目的蛋白低表达。 多个转录元排列 大分子量蛋白 同于转录元，多编码框排列 中等分子量蛋白 同一编码框，多肽段排列 小分子量蛋白 整合型外源蛋白 分泌型外源蛋白 在信号肽引导下分泌到胞外或周质中 5. 高效表达外源基因的策略 优化载体设计 密码子偏爱性 mRNA 稳定性 表达蛋白稳定性 优化发酵