赤芍总苷的提取纯化与质量检查设计专业技术方案.docx

赤芍总昔的提取纯化与质量检查设计方案 1文献背景 赤芍为毛萇科植物芍药Pae onia lactiflora Pall.或川赤芍Pae onia veitchii Lynch 的干燥根，具有清热凉血、散瘀止痛的功效，其主要有效成分为芍药昔、芍药 内酯昔、氧化芍药昔、苯屮酰芍药昔、芍药花昔等单祜昔类化合物，总称赤芍 总昔，可改善机体微循环，抑制血小板凝聚，抗血栓形成，具有广泛的药理活 性⑴3],是一种可用于保健食品的中药。 1.1赤芍总昔背景意义 在药理学上，赤芍总昔对血液具有抗凝血、抗血栓以及抗内毒素和改善微循 环的作用。并且赤芍总昔对缺血性损伤如心肌缺血同样具有保护作用【4】，正是 这样的良好使用疗效，我们需要对赤芍总昔进行更多的研究，来保证临床的使 用疗效。 1.2提取研究现状 LI前报道的赤芍总昔提取工艺文献中，多采用正交实验设计法问。即分别 称取赤芍药材若干（通常800g）,以不同的提取液（水、乙醇）分别按正交实 验设计表实验，滤过，合并滤液，量取体积，即得正交实验各实验的提取液。 1.3纯化研究现状 訂前报道的赤芍总昔纯化工艺文献中，多采用正丁醇萃取法和大孔树脂吸 附法【叭 即将提取过程中，包括糖类、脂类等许多杂质在内的浸膏提取液，补 充蒸憎水至药材的2倍量，作为待纯化样品溶液。 纯化方法1 （正丁醇萃取法）：取上述待纯化样品溶液200ml,取等量石油 瞇萃取3次，除去石油醯层，然后用水饱和后的正丁醇萃取3次，收集正丁醇 层，再用200ml蒸镭水洗1次，弃去水层，减压回收正丁醇，所得浸膏于真空 干燥器中干燥。 纯化方法2 （大孔树脂吸附法）：D101大孔吸附树脂100g,经95%乙醇浸 泡12h,充分溶胀后装柱，蒸憎水洗至无醇味，备用。上述待纯化样品溶液取 200ml,上树脂柱，3倍量蒸憾水洗，再用3倍量的乙醇洗脱，收集20%洗脱组 分，减压回收乙醇，剩余浸膏于真空干燥器中干燥。 1.4质量控制 赤芍中赤芍总昔质量控制包括性状鉴别（颜色、气味）、薄层鉴别（蓝紫色 斑点）、以及对其进行高效液相色谱的含量测定（检测波长为230nm,理论板 数按芍药昔峰汁算应不低于3000）以及水分、炽灼残渣，重金属等检测。 2赤芍饮片的质量检査 2.1性状：本品应呈圆柱形，稍弯。表面棕褐色，粗糙，有纵沟和皱纹，并有须 根痕和横长的皮乳样突起，有的外皮易脱落。质硬而脆，易折断，断面粉白色 或粉红色，有的有裂隙。气微香，味微苦、酸涩。 2.2鉴别：取本品粉末0.5g,加乙醇10ml,振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣 加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药昔对照品，加乙醇制成每1ml 含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VIB）实验，吸取上述 两种溶液各4卩1,分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-中醇- 甲酸（40： 5： 10： 0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶 液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显 相同的蓝紫色斑点。 2?3含量测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。 2.3.1色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以屮醇-0.05moI/L磷酸二氢钾溶液 （40： 65）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药昔峰计算应不低于 3000o 2.3.2对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药昔对照品适量，精密称 定，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液,即得。 233供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入屮醇25ml,称 定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用屮醇补足减失 的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.3.4测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10卩1,注入液相色谱仪，测定， 即得。 本品含芍药昔（C23H28O11）不得少于1.8% 参考文献：2015版《中国药典》 3赤芍总昔的提取工艺 3.1指标成分的选择及含量测定 赤芍中所含丰富的昔类成分总称赤芍总昔，为赤芍的主要活性部位，其中 以芍药昔的含量最高，选择芍药昔作为含量测定的指标成分。 3.1.1 HPLC色谱条件的优化选择 色谱柱的选择:考察 Hypersil ODS( 150mm*4.6mm,5jim)和 Hypersil BDS(200mm*4.6mm,5 屮 n) 流动相选择：流动相考察中醇-水系统、甲醇-0.05%磷酸溶液系统、乙睛-水 及乙0-0.05%磷酸溶液系统。 流速选择：流速考察 0.6ml/min 0.8mmin、1 .OmI/min 3.1.2对照品溶液的制备 精密称取芍药昔对照品10.63mg,置25ml量瓶中，加中醇溶解并稀释至刻 度，摇匀，