6细菌培养及染色显微观察学习资料.pdf

细菌培养及染色观察 实验目的 ▪ 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。 ▪ 学习并初步掌握革兰氏染色，了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分 类鉴定中的重要性。 ▪ 学习细菌芽孢的染色、观察方法； ▪ 初步认识各种细菌的形态特征。 ▪ 学习并掌握油镜的原理和使用方法。 2 实验器材 ▪ 实验材料：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、空气细菌； ▪ ▪ 染色剂：草酸铵结晶紫、番红染液等 革兰氏染色液：初染剂——结晶紫、媒染剂——卢戈氏碘液、脱色剂——95％乙 醇、复染剂——番红 ▪ 实验器材： 显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲 苯），擦镜纸，生理盐水等 3 实验内容 ▪第 Ⅰ部分：细菌的简单染色 ▪第II部分：细菌的革兰氏染色 ▪第III部分：细菌的芽孢染色 ▪第IV部分：身体、物品微生物检测 4 第I部分 细菌的简单染色 基本原理 细菌细胞小而透明，在 光学显微镜下菌体与背 细菌染色后，借助于颜色的反衬作用， 景无明显的明暗差； 可以更清楚地观察到细胞的形态特征； 6 染色机理 碱性染料 电离 发色基团 助色基团 碱性染料电离时，其分 染料由发色基团和助 子的染色部分带正电荷 色基团组成，发色基 团赋予颜色性质，助 色基团则给予化合物 能够成盐的性质。 细菌细胞壁在通常 情况下带负电荷 通过静电作用力，染料牢固地结合在菌 体上，很难被洗脱或用机械方法除去。 7 1. 挑菌 取一洁净的载玻片，滴一小滴生理盐水于玻片中央，以无菌操作(图1)挑取少许菌体 于液滴中。 图1 ：无菌操作——挑菌 8 2. 涂片 ▪ 用接种环在液滴中作圆周涂布(图2),使菌体均匀分散。 ▪ 注意：滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 图2 ：涂片 9 3. 干燥固定 用电吹风吹干菌液，制成菌膜(图3) 。 注意：保持电吹风与载玻片的适当距离，以免温度过高破坏细胞形态。 图3 ：电吹风干燥固定 10 4. 染色 ▪ 将玻片平放于搁架上，滴加 染液于涂片上。染液刚好覆 盖涂片薄膜为宜(图4) 。 ▪ 染色时间： ▪ 吕氏碱性美蓝 1 ～2min ▪ 石炭酸复红 1min 图4 ：染色