4.4荧光酵母转化与观察学习资料.pdf

荧光细胞器酵母转化与观察 实验目的 1.学习制备酵母菌筛选缺陷培养基； 2.通过特定质粒转化缺陷型酵母菌，学习酵母菌转化 的基本原理及方法； 3.学习使用荧光显微镜； 4.观察酵母转化子各种荧光定位细胞器。 2 酵母菌简介 ▪ 酵母菌泛指能发酵糖类的各种单细胞的真菌。 ▪ （1）个体一般以单细胞状态存在 ▪ （2）多数营出芽繁殖 ▪ （3）能发酵糖类产能 ▪ （4）细胞壁常含甘露聚糖 ▪ （5）常生活在含糖量较高、酸度较大的水生环境中 3 芽殖：各属酵母菌都存在 酵 裂殖：Schizosaccharomyces （裂殖酵母菌） 母 无性 菌 假酵母 节孢子：Geotricum （地霉属）等 or 的 拟酵母 产无性孢子 掷孢子：Sporobolomyces 繁 （掷孢酵母属）等 殖 厚垣孢子：Candida albicans等 方 式 有性（产子囊孢子）：Saccharomyces （酵母属） 真酵母 Zygosaccharomyces （接合酵母属）等 44 酵母菌的形态 酿酒酵母菌扫描电镜和透射电镜照片（Masako O, 1998） 5 酿酒酵母特点 ▪ （1）一般情况下都以营养体状态进行出芽繁殖； ▪ （2）营养体既能以单倍体（n）形式存在，也能以二倍体（2n）形 式存在； ▪ （3）在特定的条件下进行有性繁殖。 6 酵母是重要的微生物资源 ▪ 酵母菌是人类的第一种“家养微生物” ▪ 酿造工业：酒类的生产、果汁发酵 ▪ 食品工业：面包、馒头的制作 ▪ 医药工业：核苷酸、CoA、细胞色素C、凝血质和维生素等生化药物 和试剂 ▪ 饲料工业：单细胞蛋白（SCP）“人造肉” ▪ 化学工业：有机酸、酒精、脂肪酸和甘油等 7 酵母菌的基因工程 ▪ 酵母菌是最简单的真核模式生物，全基因组测序，基因表达调控机理 比较清楚，遗传操作简便，具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后 加工系统； ▪ 大规模发酵历史悠久、技术成熟、工艺简单、成本低廉，能将外源基 因表达产物分泌至培养基中，不含有特异性的病毒、不产内毒素。 8 发展历程 1. 1974年rlarck—walker和Miklos发现在大多数酿酒酵母中存 在质粒。 2. 1978年Hmnen将来自一株酿酒酵母的leu 2基因导入另一株 酿酒酵母，弥补了后者的Leu2缺陷，标志着酵母表达系统 的建立。 3. 1981年Hinnen等用酵母基因表达系统表达了人干扰素。 4. 我国也在1983年首次用酵母菌表达了乙型肝炎病毒表面抗 原基因。 5. 1996年在全世界科学家的通力合作下，完成了第一个真核 生物——酿酒酵母全基因组的测序。