2.4.4.4 特殊PCR大学生物学.pdf

特殊 PCR LOGO 逆转录PCR （reverse transcription PCR ，RT-PCR ） 原理 提取组织细胞总RNA ，以其中的mRNA为模板，采用特异性引物、olig-dT或 随机引物，在逆转录酶的作用下反转录成cDNA。再以cDNA作为模板，通过 特异性引物，PCR扩增目的基因。 逆转录PCR （reverse transcription PCR ，RT-PCR ） AAAAAAAAAn AAAAAAAAAn AAAAAAAAAn AAAAAAAAAn AAAAAAAAAn 5’ AAAAAAAAAn 3’ AAAAAAAAAn cDNA第一链 反转录酶 TTTTTTTTT cDNA第二链 Taq AAAAAAAAA AAAAAAAAA 上游引物 上游引物 下游引物 逆转录PCR （reverse transcription PCR ，RT-PCR ） TTTTTTTTT AAAAAAAAA AAAAAAAAA AAAAAAAAA 巢式PCR P2下 P1下 P1上 P2上 反义PCR 已知序列 限制酶X酶切 限制酶切点（X ） 限制酶切点（X ） 连接 用途 ： 未知序列的研究 PCR 未知序列 LA PCR Hot Start PCR ●第一步PCR反应的 升温期 （部分 ）， 控制DNA聚合酶使 其 不 发 生 作 用 。 实