2.3.2.1 测序大学生物学.pdf

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2021-01-31 发布于广东
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测序（1 ） LOGO 最早的测序技术：酶切测序法 Robert W. Holley – Facts. NobelP. Nobel Media AB 2019. Mon. 14 Jan 2019. /prizes/medicine/ 1968/holley/facts/ 利用酶切测序法推测Ala-tRNA序列（~77个核苷酸） 1. 胰RNA酶、RNA酶T1消化Ala-tRNA → 层析分离、纯化寡核苷酸（消化产物）；胰RNA酶消化产物层析图 RNA酶T1消化产物层析图 Holley Rw, Everett Ga, Madison Jt, Zamir A. Nucleotide sequences In the yeast Alanine transfer ribonucleic acid. J Biol Chem. 1965, 240:2122-2128. 利用酶切测序法推测Ala-tRNA序列（~77个核苷酸） 2. 纸电泳、双向纸层析鉴定消化产物组分；层析峰组分层析峰组分 Holley Rw, Everett Ga, Madison Jt, Zamir A. Nucleotide sequences In the yeast Alanine transfer ribonucleic acid. J Biol Chem. 1965, 240:2122-2128. 利用酶切测序法推测Ala-tRNA序列（~77个核苷酸） 3. 通过不同的两种消化产物片段间可能存在的重叠，间接推导出完整的序列。酶切位胰RNA酶酶切片段点 RNA酶T1酶切片段胰RNA酶酶切片段（续） RNA酶T1酶切片段（续） Ala-tRNA候选排序方式之一 Holley Rw, Everett Ga, Madison Jt, Zamir A. Nucleotide sequences In the yeast Alanine transfer ribonucleic acid. J Biol Chem. 1965, 240:2122-2128. 前直读法（pre-direct reading ）应用不很广泛 3. 通过不同的两种消化产物片段间可能存在的重叠，间接推导出完整的序列。酶切位胰RNA酶酶切片段点 RNA酶T1酶切片段胰RNA酶酶切片段（续） RNA酶T1酶切片段（续）