02-2-细胞培养大学生物学.pdf

2.2 细胞培养 大家好！在上次课“细胞的微观探秘”里，我们讲应用显微技术，可以深入 探究细胞的微观社会。从看到细胞的那一刻开始，人们就渴望知道“活的和动态 的”细胞是如何生长？如何增殖？如何变老和死亡？也期待着利用细胞“活的生 命力”为我们人类的生产生活和生命健康服务。实现这一切基本技术是细胞培养。 何谓细胞培养？就是利用人工的方法和体外条件对特定的细胞进行培育和 养活。确切些讲，细胞培养就是指模拟体内生长环境，将采集的体内组织细胞放 置在特殊条件下使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一类技术。 细胞培养的基本条件包括： 1）严格无菌：要杜绝一切微生物对细胞的污染； 2 ）合适营养：除生命所需基本营养外，许多细胞还需要一些特定的生长因 子，在细胞培养时经常需要添加胎牛血清或新生牛血清就在于此； 3 ）适宜温度：一般是培养细胞所来源的生物体生长时的适宜温度，如人类 细胞培养通常为37oC； 4 ）适宜酸碱度：常用缓冲液维持相对恒定的酸碱度，大多数细胞对酸敏感， 培养时需要中性和弱碱性条件。 体外培养的细胞与体内细胞相比，表现出以下几个特点： 1）停止分化：就是不再分化形成特定结构与功能的组织； 2 ）贴壁和伸展：是指培养的细胞粘附在培养材料表面，伸展成扁平状； 3 ）接触抑制和密度依赖性：一般表现为铺满培养材料表面后停止增殖。 细胞培养技术从19 世纪中期才逐步建立和完善起来。 1）细胞培养技术的创立。包括： 1856 年，实现了植物组织细胞培养，成功应用红豆杉细胞培养生产紫杉醇， 这是首次有记录的细胞培养。 1885 年，威廉•鲁(Wilhelm Roux)进行了鸡胚神经板体外培育，可维持其存活 数天，这是首次有记录的动物组织培养。 1887 年，朱利斯·佩特里 （Julius Richard Petri ）发明了一种沿用至今的透明 细胞培养皿，称为佩特里培养皿(Petri dish)，使用十分简便，极大地促进了细胞 培养技术的发展； 还有1903 年Jolly ，1906 年Beebe 等发明了盖片悬滴细胞培养法等。 2 ）细胞培养技术的完善。包括： 1907 年，哈里森(Harrison)创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，在无菌条 件下用淋巴液作培养基，培养蛙胚神经组织存活数周； 1912 年，卡雷尔(Carrel)建立了细胞培养中的换液和传代技术，完善了悬滴 培养法；1923 年，他还独具匠心地设计了卡氏瓶培养法，用此法可根据需要随 时更换培养液，极大地推动了细胞培养研究。卡氏瓶与现在通用的细胞培养瓶并 无二至。 3 ）细胞培养基的研究和发展。细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营 养环境，为细胞体外生长增殖的提供营养物质条件。培养基类型主要包括：天然 细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。 1）天然培养基：血清是常用的天然培养基，如广泛使用的胎牛血清和小牛 血清。 2 ）合成细胞培养基：最常用的合成基础培养基包括MEM、DMEM、RPMI1640 和M199 等。基础培养基添加血清、抗生素等物质后，就叫完全培养基了。这是 我们进行细胞培养时最常用到的培养基。 3 ）无血清培养基：由于动物血清成分复杂，对细胞活性研究有影响，也对 细胞培养产物的分离、提纯以及检测造成干扰。因此，人们一直在研制无血清培 养基，现已有商业化产品。 细胞培养技术及其运用包括三个方面： 1、原代培养 2、传代培养 3、大规模培养 所谓原代细胞培养是指直接从机体组织中分离获取细胞后立即进行培养。严 格意义上讲，原代培养是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基 本性质。而通常我们把从体内分离到的细胞十代以内的培养统称为原代细胞培养。 最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。 组织块培养：是指把剪切的组织块在体外培养条件下进行保存，维持其存活 和组织分化能力，依然还保持组织的结构或功能。如视频中所展示的小鼠主动脉 环培养。 分散细胞培养：是指用物理或化学的方法把组织中的细胞进行分散分离后再 进行细胞培养的技术。常用胰蛋白酶和胶原酶消化剪碎的组织，获得分散的单细 胞悬液，然后再给予适宜的培养条件进行培养。如视频中所展示的小鼠脾细胞培 养。 细胞在体外