2.1.2 基因组DNA的提取.pdf

基因组DNA的提取 LOGO 基因组 基因组是指一个个体、器官、组织活细胞内的所有DNA。基因 组一般包括一个生物体全部的遗传信息，是进行目的基因片段 扩增、文库构建及全基因组测序等工作的物质基础。 基因组 一般包括四个基本步骤： （1 ）细胞的培养与收集，或相关组织的获得 （2 ）细胞的破碎与内容物的释放 （3 ）基因组DNA与其他细胞内容物的分离及提取 （4 ）基因组DNA分子的浓缩与收集 细菌基因组DNA的制备 与哺乳动物等高等生物相比，细菌细胞具有培养简便、成本低、 分离收集简单等有利于制备基因组DNA的特点。 细菌基因组DNA的制备 1 去除细胞壁 溶菌酶，NaCl ， 破细胞膜 2 Tris-醋酸，醋酸钠, EDTA, SDS, pH7.8 CTAB(十六烷基 SDS和蛋白酶K 三甲基溴化铵) ： 3 DNA纯化 溶解细胞膜，使 酚-氯仿-异戊醇或过柱子除去蛋白 核蛋白解聚，结 合核酸 4 沉淀DNA 0.6倍体积的异丙醇 哺乳动物基因组DNA的制备 哺乳动物基因组制备过程和操作应更加温和，以减少断 裂的机会。 哺乳动物细胞基因组DNA的抽提 培养的细胞：胰酶消化 组织粉碎 组织块：液氮中研磨 细胞裂解 Tris 、EDTA 、NaCl、SDS 、RNase 纯化DNA 用苯酚和酚-氯仿抽提蛋白质 沉淀DNA 用2倍体积的无水乙醇 植物基因组DNA的制备 由于植物细胞中所含的酶类会对植物DNA抽提产生不利 的影响，所以通常会在抽提液中添加抗氧化剂或强还原 剂，如β-巯基乙醇，以降低酶类的活性 植物组织中制备 DNA 细胞裂解： 组织粉碎： 2%CTAB/2- ME 液氮中研磨 或1% SDS和蛋 白酶K ，65 oC 成细粉末 温育