2.3.2.2 测序大学生物学.pdf

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2021-01-31 发布于广东
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测序（2 ） LOGO 边合成边测序法（sequencing by synthesis, SBS ，又称Sanger法） The Nobel Prize in Chemistry 1980. N. Nobel Media AB 2014. Web. 26 Aug 2015. /nobel_prizes/chemistry/laureates/ 1980/ SBS法（Sanger法）原理 DNA聚合酶催化的DNA链的延伸在3’-OH末端进行。延伸用的原材料：dNTP （ N指 A、T、G、C ）。引物 From: Watson. et al. Molecular biology of the genes, 7th edition. SBS法（Sanger法）原理 ddNTP ：2’,3’-双脱氧三磷酸核苷酸 ddNTP终止DNA链的延伸反应： 3位脱氧，失去游离3’-OH ，其他的dNTP、ddNTP无法再添加到DNA链上。引物 From: Watson. et al. Molecular biology of the genes, 7th edition. SBS （Sanger法）原理以待测DNA为模板的PCR反应：利用DNA聚合酶延伸结合在模板上的引物，直到掺入一种链终止剂ddNTP →通过ddNTP ，读出待测序列。 1. 测序引物5’端放射性同位素标记；被标记的引物待测DNA 2. 待测DNA进行4个单独的测序PCR反应：相同的待测DNA模板、引物体系 1 体系2 体系3 体系4 /img/articles/Sanger-sequencing.png 4种dNTP + 特定的低浓度ddNTP SBS （Sanger法）原理被标记的引物待测DNA模板 3 . dd NT P随机掺入正在延伸的体系 1 体系2 体系3 体系4 DNA链，终止链的延伸，形成长短不等的新链混合物： 5’标记引物端 + ddATP3′端 /img/articles/Sanger-sequencing.png AGTCATT ACGGT 待测DNA模板体系1 新链TCAGTAA ： *TCAGTAddATP 新合成子链 PCR反应正常延伸到待测模板DNA第七位 T碱基时掺入了一个ddATP分子 SBS （Sanger法）原理被标记的引物