2.3.1.3 核酸分子杂交.pdf

核酸分子杂交 LOGO 核酸分子杂交种类 核酸分子 杂交 固相杂交 液相杂交 印迹杂交 原位杂交 膜上印迹杂交 DNA或RNA ↓ 将待测核酸序列结合到一定的支持物上， 电泳分离核酸片段 然后与存在于液相中的核酸探针进行杂 ↓ 交的过程称为膜上印迹杂交。 转移至固相支持物（印迹技术） ↓ 预杂交 常见的固相支持物： ↓ 硝酸纤维膜、尼龙膜、 PVDF膜 杂交 ↓ 洗去未杂交探针 ↓ 杂交信号检测 膜上印迹杂交 印迹方法 虹吸印迹 真空转移法 电转移法 虹吸印迹示意图 真空转移示意图 电转移示意图 膜上印迹杂交 类型 （1 ）Southern印迹杂交(Southern blot hybridization) （2 ）Northern印迹杂交(Northern blot hybridization) （3 ）斑点杂交(dot hybridization) （4 ）反向斑点杂交(reverse dot hybridization) （5 ）菌落或噬菌斑杂交 Southern印迹杂交 Northern印迹杂交 原理 RNA经过变性琼脂糖凝胶电泳分离后，转移到硝酸纤维膜或尼龙膜上，经过杂交， 分析mRNA的大小及含量。 方法 提取组织细胞总RNA→RNA定量→变性胶电泳→转膜→干膜→预杂交→ 杂交→洗膜 →压片→洗片→图像分析 应用 半定量分析mRNA的含量；确定mRNA分子的大小。 菌落印迹杂交 原位杂交 定义 取材 ↓ 用标记的已知核酸序列为探针，使其与 组织、细胞固定 细胞组织或切片中核酸进行杂交检测的 ↓ 预杂交 方法称为原位杂交。