功能化磁性Fe3O4复合纳米粒子制备及其辅助变性溶菌酶复性的研究.pdf

摘要 摘要 Artificial molecular chaperone 近年来，基于人工分子伴侣 （ ）的纳米粒子 Nanoparticles,NPs Nano-chaperone （ ）、纳米伴侣 （ ）以及功能化磁性复合纳米粒子 （MagneticNanoparticles, MNPs）辅助蛋白质复性方法相继受到了关注。由于磁性 Fe O 纳米材料具有生物相容性好、毒性低、易制备等优点被广泛用于生命科学等众 3 4 多领域，更重要的是还能被重复利用或回收。此外，与生物有关的许多小分子化合物 不但非常容易获得，还可以保持生物分子的疏水、静电作用，可用于功能化材料的修 Cholesterol 2- MPC 饰，如胆固醇 （ ）和 甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱 （ ）。因此，本论 文的目的是设计和合成功能化Fe O 复合纳米粒子，并将其作为人工分子伴侣用于变 3 4 性溶菌酶的复性研究。论文包括以下三个部分： 1.文献综述 蛋白质折叠包括了体内外相关研究的两大部分。在体内蛋白折叠机制的指导下， 体外的蛋白复性方法获得了长足的发展，在推动重组蛋白药物规模化生产及其相关产 品的产业化进程中发挥着重要的作用。在这一章节中，将对溶液中和色谱柱上的人工 分子伴侣为基础发展的蛋白质复性新方法以及新进展进行综述，包括添加剂、新型色 谱固定相、纳米粒子、磁性Fe O 复合纳米粒子以及本论文研究意义和研究内容。 3 4 2.功能化磁性Fe O 复合纳米粒子的制备与表征 3 4 生物小分子Cholesterol和MPC 的分子结构上具有与蛋白质之间发生疏水作用和 静电作用基团，可用于功能化磁性Fe O 纳米粒子的修饰。在本章节中，首先以共沉 3 4 淀法合成Fe O ，并通过多巴胺的自聚合反应，获得Fe O @PDA 纳米粒子。然后， 3 4 3 4 Fe O @PDA Cholesterol MPC 以 3 4 作为次级反应平台修饰 与 分子，分别制备具有疏水 作用和静电作用基团的功能化磁性Fe O 复合纳米粒子。分别采用傅里叶红外光谱、 3 4 X X 热重分析、 射线粉末衍射、 射线光电子能谱、透射电子显微镜以及磁学测量系统 等手段对所制备材料进行表征。结果证实，成功地合成了具有较好的外观形貌和磁响 应性能的Fe O @PDA@Cholesterol 和Fe O @PDA@MPC 复合纳米粒子，其粒径约 3 4 3 4 为17nm、饱和磁化强度分别为20.6emu/g 和20.9emu/g。 3. 功能化磁性Fe O 复合纳米粒子辅助变性溶菌酶复性 3 4 研究表明，利用磁性纳米粒子对蛋白复性的优点在于，修饰合适功能基团的微小 I 西北大学硕士学位论文 粒子可以精确地调节与变性蛋白分子之间疏水或静电作用，实现变性蛋白的有效复 性。在本工作中，采用稀释法探究了制备的磁性Fe O 纳米粒子作为添加剂对变性溶 3 4 菌酶复性效果，并