新型氧杂多环荧光染料的合成及其在蛋白染色中的应用.pdfVIP

摘要 摘要 作为一种重要的翻译后修饰，蛋白质糖基化在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、 细胞癌变等生命活动中起着重要作用。凝集素芯片作为近年来新问世的，用于检测糖蛋 白的技术，由于其具有高通量，便捷，快速等优点，得到了广泛的关注。用于制作凝集 素芯片的样品多采用荧光标记，后用消散场荧光激活检测技术进行信号检测。现今常用 于荧光标记的染料多为菁染料，但其常存在合成路线复杂，成本居高不下，水溶性较差， 以及随着甲川链增加而稳定性逐渐下降等问题。因此，摒除必须由菁染料标记糖蛋白的 刻板印象，合成修饰得到新型的荧光染料，弥补其缺陷，具有重大的意义。本文选择修 饰氧杂蒽结构，以得到具有标记蛋白能力的荧光染料为研究目的，设计，合成，并表征 出两类共六种氧杂多环结构的荧光染料，对其性能及其应用进行研究。主要包括以下两 部分： （1）合成了氧杂多环结构为主体的非刚性平面的两种新型荧光染料YD-1 和YD-2 ， 刚性平面的四种新型荧光染料YN-1，YN-2 ，YH-1，和YH-2 以及修饰罗丹明B 得到的 1 13 新型荧光染料YB 。通过HRMS (ESI) 、H NMR 、 C NMR 和IR 对这七种新化合物的 结构进行了表征；对除YB 之外的其余六种染料的光谱性质进行了检测，证明了这六种 染料都具有较好的耐光性；其中，YD 系列的荧光的发射波长在600nm 附近，斯托克斯 位移在80nm 左右；YN 与YH 系列的荧光的发射波长更偏向于近红外范围（600nm 以 上），斯托克斯位移基本在 60-80nm，这些优点能有效的降低荧光成像中生物自体发光 所带来的干扰；根据pH 对染料荧光强度的影响可知其在生物体内 pH 范围内具有稳定 的荧光性质。 （2 ）将YD ，YN 和YH 三系列六种新型荧光染料应用于糖蛋白的标记并取得不错的 效果，表明这些染料能以共价键的形式与蛋白质结合，给予糖蛋白以荧光信号，在之后 分析蛋白质上的糖链种类，制作凝集素芯片等生物应用上具有实际的应用价值。 关键词：氧杂多环，荧光染料，合成，光学性质，蛋白染色 I 目录 目录 摘要I Abstract III 目录 V 第一章 绪论 1 1.1 前言 1 1.2 荧光染料的发展及其结构的修饰 1 1.2.1 荧光染料的发展 1 1.2.2 氧杂蒽环荧光染料及其结构修饰 3 1.2.3 菁类荧光染料及其结构修饰 5 1.2.4 香豆素荧光染料及其结构修饰 6 1.2.5 BODIPY 荧光染料及其结构修饰 8 1.3 生物荧光标识技术的发展 11 1.3.1 生物荧光标识方法的分类 11 1.3.2 荧光标识剂的种类 13 1.3.3 生物荧光标识剂在蛋白质分析中的应用 13 1.4 凝集素芯片在糖蛋白研究领域的应用 15 1.4.1 糖蛋白的分类与作用 15 1.4.2 研究糖蛋白的技术 16 1.4.3 凝集素概述 16 1.4.3 凝集素芯片及其发展前景 17 1.5 本课题研究目的以及内容 18 第二章 氧杂多环荧光染料YD 与罗丹明荧光染料YB 的合成表征以及YD 系列染料的光 学性质与蛋白染色应用研究 21 2.1 引言 21 2.1.1 合成路线分析 21 2.1.2 反应底物的筛选 22 2.2 仪器与试剂 23