冰冻切片小结.docxVIP

冰冻切片（fr。咖section）是一种在低温条件卜使组织快速冷却到一定破度，然后进行 切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，并对组织变化不人等优点。在科研等领 域广泛应用。 在本研究中，我们取用卄肃高山细毛羊胚胎性皮肤，根据配种时间，分别采取：87d、 90d, 93d、96d、99d、102d、105d. 108d. llld 114d H7d、120d. 123d 226d、129 d、 232 d、135d. 138d. 141 d. 144 d. 147d胚胎性皮肤，在头顶、颈侧、髻甲、颈上缘、肩 脚、体侧、背部、荐部、股部、腹部10个部位分别取25）2的皮样，用depc处理PBS缓冲 液冲洗处理后投入液氮后，带入实验室-80 *C冰箱保存备用。 步骤： 1.冰冻切片组织的制备： 固定将组织置于4%多聚甲醛固定液中，4°C摇床过夜。 漂洗将固定后的标本用IX PBS漂洗三次，每次15分钟。 脱水将组织1ST 30%蔗糖溶液中，4°C摇床过夜。第二天观察是否脱水完全，判断的标准是， 为管竖立时，组织是否沉到蔗糖溶液的底部，若组织己完全沉降到蔗糖溶液的底部，平放或 爲荡后仍能沉降，则可判断组织已脱水完全。 包埋将组织倒入培养皿中，用眼科刀将脑和脊髓根据切片切面的需要在不同的部位切开， 并做好头尾端的标记。之后将组织置于包埋盒中，用滤纸吸下组织周圉寒余的蔗糖溶液，滴 加OCT optimal cutting temperature compound）到包埋盒中，用移液枪头小心的将组织周 甬的O.C.T混匀，切忌起气泡，静止10分钟，以防切片时脱片。朿新取一个包埋盒，将组 织移入到包埋盒屮，倒入OCT,再次用移液枪头将组织与O.C.T混匀，将组织按切片需要方 向摆放于包埋盒的底部，迅速置于干冰与酒精的混介物中。在包埋盒上做好标记，用保鲜膜 和锡纸包好后放入?80°C冰箱贮藏待切。 2?切片： 切片前先将切片机的箱体温度及刀头温度均设为?20°C,把包埋盒从-80°C冰箱取出置于切片 机中平衡半小时左右。之后将包埋块用0,C.ThM定在样品托上，然后将样品托固定在样品头 上，调整合适的位置，以使样品与刀头处于平行位置，手动切片。用细毛笔将切片均匀整齐 地平铺在明胶包被的我玻片上，室温卜?晾片l-5min后进行HE染色。 3.冰冻切片的快速染色 冰冻切片附贴于我玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。冰冻切 片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样町以使切片中细胞内各种物质都 在没有任何变化的情况下被固定起來，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存。 方法： 切片固定30$?1分钟 水洗。 染苏木素3?5分钟。 分化。 于碱水中返蓝1 0秒。 伊红染色3?5秒。 脱水，透明，中性树胶封固。 切片1分钟，固定1分钟，染色共5分钟。 4.观察结果： 利用1 c i c a DM 5 5 0 0型号显微镜观察切片，找寻需要的目标区域与目标细胞 （图一）细毛羊皮肤（肩部）冰冻切片（横切） （图二）细毛羊皮肤（股部）冰冻切片（纵切）