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无血清培养基的市场调查报告
第一章无血清培养基概述
通常,动物细胞的生长均有赖于血清的存在,在普通培养基屮,如不加血清,绝大部分细胞不 能增殖。目前,血清培养基中通常添加的比较好的血清是牛血清。经研究发现细胞培养屮使用牛血淸 存在污染外源病毒和致病因了的风险:由于不同批次牛血清间的生物活性和因了的不一致,导致产品 和实验结果的重现性差:制品屮残留的牛血清易引起接种者对血清的过敏反应。
无血清培养基(Serum-Free Media),通常以SFM表不,顾名思义,就是在细胞培养屮不需要添加 血清,但是在某些应用屮可能要添加生长因了或细胞因了。无血清培养基屮添加了血清的主要成分: 粘附因了、生长因了、必需的营养物质和激索等,能减少血清带来的不利因索,使细胞培养的条件更 稳定。经历了天然培养基、合成培养基麻,无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大 趋势。采用无血淸培养可简化纯化和鉴定备种细胞产物的程序,避免病毒污染造成的危害。
一、无血清细胞培养基及其优缺点
(一)无血清培养基及分类
无血清培养基是继天然培养基,合成培养基Z示的第三类培养基。与传统的培养基相比较,无血 清培养基是不含动物血清或其他生物提取液,但仍可以维持细胞在体外校长时间生长、繁殖的一种培 养基。无血清培养基由于其组成成分相对清楚,制备过程简单,在现代生物技术学领域得到广泛应用。 无血清培养技术也是阐明细胞生长,增值,分化及基因表达调控的基础研究问题的有力T具。
目前,无血清培养基的研究有两个方向:一是培养基中不含有任何动物来源的添加组分;二是培 养基屮不含有不明确的添加组分。依此可以将当前M川较多的无血清培养基归纳为以下四种:
1L般意义上的无血清培养基,用各类可代替血清功能的生物材料配制细胞培养基,如牛血清白 蛋H (BSA),转铁蛋白,脇岛素等生物大分了物质,以及从血清屮提取的去除蛋片质的混合脂类以 及水解蛋白等。其特点是培养基屮的蛋白含量较高,添加物质的化学成分不明确,其屮含有大量的动 物来源蛋白。
无动物来源培养基:许多商业公司开发的无动物來源培养基是基于生产重组药物的安全考虑, 培养基屮的添加组分无动物来源,需要的蛋片来源于重纟H?蛋白或者蛋白水解物,这些组分可以保障细 胞生长及增殖的需要。
无动物蛋白培养基:培养基完全不用动物来源的蛋白,但仍有部分添加物是来源于植物蛋白的 水解片段或合成多肽片段等其他衍生物。此类培养基组分相对稳泄,但必须添加类固醉激索和脂类前 体,并且对培养的细胞是高度特异性的。
化学组分限定培养基,此类培养基是目前最安全的,最为理想的培养基,首先可以保证培养基 批次间的一致性,其中所添加的少量动物来源的蛋白水解物、蛋白都是成分明确的组分。其特点是培 养基的性质确定,配起培养基来也比较方便。
(二)无血清培养基的优缺点
无血清培养基的优点:
可避免血清批次间的质量变动,提高细胞培养和实验结果的重复性。
避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。
避免血清纟R分对实验研究的影响。
有利于体外培养细胞的分化。
可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。
组分稳定,可大量生产。
不含有丝分裂原抑制剂,可以促进细胞增殖。
无血清培养基的缺点:
1?细胞在无血清培养基屮易受某些机械因素和化学因素的影响,培养基的保存和应川不 如传统的合成培养基方便。
成木较高。
针对性很强,一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。
处于发疔的不同分化阶段的细胞(例如干细胞与定向前体细胞相比)需要不同的配方,对生长 因子和细胞因子的选择尤为重要。而且在去除血清的同时,也去除了一些血清蛋白具有的保 扩|、解毒作用,因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的要求更高。
二、无血清培养基组成及主要添加因子
无血清培养基由营养完全的基础培养基添加激素,生长因子,贴壁因子和结合蛋白而组成。
(一) 基础培养基
早期用于细胞培养的基础培养基有血浆凝块,淋巴液,大豆蛋白豚和胚胎浸斉等沢然培养基。1950 年Morgan等在前人的研究基础上研究出199培养基,是动物细胞培养基发展到一个崭新的阶段,及合 成培养基阶段。合成培养基是按细胞生长需要将一定比例的氨基酸、维生素、无机盐、匍萄糊等组合 成的基础培养基。忖前市场上已经有上百种的合成培养基商品。在众多的合成培养基中,MEM、 DMEM、RPMI 1640、F12、和TC100的使用最为广泛。
基础培养基的成分是完全已知的,因此在对不同的细胞株进行培养时可以对基础培养基的某些组 分进行相应的调整,以更好的符合细胞株的营养要求或提高目的蛋白的表达量。
(二) 主要添加因了
又称补充因子,是代替血清的各种因子的总称。多数无血清培养液必须补加3—8种因子,任何单 一因了都不能取代血清。已知有100多种此类因了,其中有些是必须补充因了,
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