2015年版微生物限度检验操作规程[文].docxVIP

标 准 规 范 20XX standard E 2015版微生物极限查验操作规程 意图 树立微生物极限查看操作规程，规范操作，确保成果的准确性。 规模 制品、辅料、内包装袋及纯化水的查验。 内容概述：本查验操作规程依据我国药典2015年版四部《公例1105 非无菌产品微生物极限查看：微生物计数法》和《公例1106 非无菌产品微生物极限查看：操控菌查看法》进行查看。 微生物计数法 一、计数办法 1．微生物计数法系用于能在有氧条件下成长的嗜温细菌和真菌的计数。 2、计数办法 本法包含平皿法、薄膜过滤法。 3、计数培育基适用性查看和供试品计数办法适用性查看 供试品微生物计数中所运用的培育基应进行适用性查看。供试品的微生物计数办法应进行办法适用性实验，以承认选用的办法适合于该产品的微生物计数。 4、菌种及菌液的制备 4.1实验用菌株的传代次数不得超越5代（从菌种保藏中心取得的枯燥菌种为第0袋），并选用适合的菌种保藏技能进行保藏。计数培育基适用性查看和计数办法适用性实验见表1。 4.2菌液制备 按表1规矩培育各实验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培育物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适合浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培育物参加3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。选用适合的办法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适合浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内运用；若保存在2-8℃，可在24小时内运用。黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的储存期内运用。 表1 实验菌液的制备和运用 4.3阴性对照 为承认实验条件是否符合要求，应进行对照实验，阴性对照实验应无菌成长。 4.4培育基适用性查看 按照表1规矩，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培育基或胰酪大豆胨琼脂培育基平板或沙氏葡萄糖琼脂培育基平板，置规矩的条件下培育。每一实验菌株平行制备2管或2个平皿。一起用相应的对照培育基替代被检培育基进行上述实验。被检固体培育基上的菌落均匀数与对照培育基上的菌落均匀数的比值应在0.5-2规模内，且菌落形状巨细应与对照培育基上的菌落共同。被检液体培育基管与对照培育基管比较，实验菌应成长杰出。 5、计数办法适用性查看 5.1供试品制备 依据供试品的理化特性与生物学特性，选用适合的办法制备供试液。制备时若需加温应加热均匀且温度不得超越45℃。供试液从制备到参加查验用培育基不得超越1小时。 5.1.1制品、辅料供试液的制备 取供试品，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 或PH7.2磷酸盐缓冲溶液，或胰酪大豆胨液体培育基或稀释制成1:10供试液，若需求，调理供试液PH至6-8，必要时用同一稀释液将供试液进一步10倍稀释系列。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 5.1.2内包装膜、袋：取供试品100cm2，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或PH7.2磷酸盐缓冲溶液，或胰酪大豆胨液体培育基，浸泡，振摇，制成1:10供试液。若需求，调理供试液PH至6-8，必要时用同一稀释液将供试液进一步10倍稀释系列。 5.2接种和稀释 按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物收回实验用供试液。所加菌液的体积应不超越供试液体积的1%。为承认供试品中微生物能被充沛检出，应首要挑选最低稀释级的供试液进行计数办法适用性实验。 5.2.1实验组 取上述制备好的供试液，参加实验菌液，混匀，使每1ml供试液所含菌量不大于100cfu。 5.2.2供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液替代菌液同实验组操作。 5.2.3菌液对照组 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按实验组操作参加实验菌液并进行微生物收回实验。 5.3供试品中微生物的收回 表1所列的计数办法适用性实验的各实验菌应逐个进行微生物收回，微生物收回选用平皿法。 5.3.1平皿法 选用倾泻法，表1中每株实验菌每种培育基至少制备2个平皿。取照上述“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15-20ml温度不超越45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培育基，混匀，凝结，倒置培育、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌液，核算各实验组的均匀菌落数。 5.3.2薄膜过滤法 选用的滤膜孔径不大于0.45um。滤膜直径一般为50mm。滤器及滤膜运用前应选用适合的办法灭菌。运用时，应确保滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少数的冲刷液过滤以潮湿滤膜。为发挥滤膜的最大过滤功率，应