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混合固定相 优化复杂样品分离的一个新策略 奥秘科技 /AUMI Technologies ( US ) 混合固定相的意义 ? 系统化的改变选择性,便于优化分离度;使难以在 同一固定相上分析的强极性和非极性化合物得以解 决 ? 降低离子交换柱的保留强度,降低缓冲盐浓度,从 而使离子交换柱可以与质谱检测器相匹配 混合相比例与保留时间曲线 Retention Dependence on the Ratio of SCX 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 20 40 60 Ratio of SCX/% 80 100 Phenol Melamine Aniline Naphthalene R t / m i n a 色谱条件 ACN : 50 mM KH2PO4 = 30:70; 1.5ml/min; 240 nm; 5 um, 300 A; 4.6 × 250; 2 ul; Room temp.; 样品: Phenol and melamine SCX Fig. a Rt (Phenol)/min 2.232 5908 SCX:ASB ASB C18 C18=4 : 6 Fig. c Fig. b 3.007 8903 4.748 3.790 11931 2.082 6312 b Efficiency (Phenol)/Plate Rt 7.382 (Melamine)/min Efficiency (melamine)/ Plate c 13123 10017 通过混合柱改善分离度 HPLC conditions : ACN : 50 mM KH2PO4 = 30 : 70; 1.5 ml/min; 35 ℃ ; 20 uL; Melamine: 2 ppm; column: 4.6 × 250 mm; SCX SCX : ASB C8 = 9 : 1 (B0014) 降低缓冲盐浓度(5倍)以用于LC-MS Sample Melamine (100ppm) LC Conditions 1 ACN : 50 mM KH2PO4 = 30 : 70;1.5ml/min; a 240nm; 5ul; 5um, 300A, 4.6 × 250mm LC Conditions 2 ACN : 10 mM KH2PO4 = 80 : 20;1.5ml/min; 240nm; 5ul; 5um, 300A, 4.6 × 250mm Fig. a was tested under conditions 1 Fig. b and c were tested under conditions 2 b SCX Fig. a Rt c (Melamine) /min 7.065 SCX Fig. b SCX:ASB C18 Fig. c 26.998 7.577 Condition ? SPE procedures 3 ml Methanol Fig. a ? LC Condition Column: Venusil AS-T C18 (SCX/C18 ) 2.1 × 150mm; 5 um, 300 ? Mobile Phase : ACN : Buffer = 50:50; Buffer:10mM NH4Ac, HAc adjust pH to 3.0 240nm, 0.2ml/min, 10 ul ? Mass Condition ESI , 5KV; Capillary Temp 300 ℃ , Capillary Voltage 15V; N2 Flow 35 arb; Positive ion detection Scan mode: TIC (MS), TIC (MS/MS); Range (m/z) 50~140 Equilibration 3 ml Water Loading 10 ml Sample Washing 3 ml Water Washing 3 ml Methanol Elution 6 ml 5% NH4OH/Methanol Concentration Evaporate by N2. Dissolve with 1 ml mobile phase LC-MS a 标准曲线7000000050000000y = 2E+07x - 33916 R2 = 0.999200000000 0 1 2 3 4 5 6 Precision: RSD=2.83% (n=5) Reproducibility : RSD=4.45% (n=5) LOD: 0.0
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