多糖的纯化方法.docVIP

多糖的纯化方法 分部沉淀法 常用的沉淀剂有甲醇、乙醇和丙酮 季胺盐沉淀法 常用的季胺盐是十六烷基三甲基铵溴化物（CTAB）及其碱（CTA--OH）和十六烷基吡啶（CPC），实验时必须控制多糖混合液的PH小于9及硼砂存在。 盐析法 常用的盐析剂有硫酸铵、氯化钠、氯化钾、醋酸钾等。 金属络合法 常用的络合剂有费琳溶液、氯化铜、氢氧化钡和醋酸铅等。 住层析 （1)纤维素住层析：常用不同纯度乙醇水溶液由高而低进行洗脱，将各种多糖分离开来。 （2)纤维素阴离子交换柱层析 此法适用于分离各种酸性、中性多糖和粘多糖。常用的交换剂为DEAE---纤维素和ECTEOLA--纤维素。 （3）凝胶住层析：常用的凝胶有葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）及DEAE---Sephadex。此法不适宜粘多糖的分离。展开剂为各种盐溶液及缓冲液，它们的离子强度最好不低于0.02. （4)亲和层析：用凝集素（一般是蛋白质和糖蛋白）做亲和色谱来分离多糖。 （5）高压液相层析 其他柱层析 用活性炭及硅胶作载体的柱层来分离多糖；或用硼砂型的离子交换树脂分离中性多糖。 超过滤法 多糖溶液通过各种已知的超过滤膜就能达到分离。 制备性区域电泳 载体通常是玻璃粉 黑木耳粗多糖 C A A P 的脱除蛋白质纯化实验 采用单独使用Sevage 法和酶法与Sevage 法结合交替进行法。单独S e v a g e 法：氯仿、正丁醇按4 : 1比例混合后，加入C A A P 溶液中，充分振荡混均，再离心，除去中间层的蛋白质凝胶。酶法与S e v a g e 法交替法：称取0.25g CAAP 充分溶于40ml 蒸馏水中，用Na2CO3 稀溶液调pH 值为7.5，加入胰蛋白酶0.013g，甲苯0.50ml，37℃恒温水解一定时间，再分别用自来水和蒸馏水透析，溶液浓缩后，再用S e v a g e 法处理。如此反复交替处理7 次，测定每次处理后各样品的蛋白质含量。 香菇多糖纯化 　凝胶柱层析检测:纯化香菇多糖用sephadex G----100 葡聚糖凝胶柱(1cm ×15cm) 进行柱层析,洗脱液 为重蒸水,5ml/ h ,每管1ml 连续收集30 管,硫酸---苯酚法逐管检测A490值,以吸收峰值为纵坐标、试管号为横坐标绘制曲线图。 　多糖柱层析分析 纯化多糖经Sephadex G---100 柱层析洗脱,苯酚----硫酸法逐管检测结果参见图1 ,从出峰时间和流量分析表明香菇多糖的分子量大于100000 ;出峰单一. 在20管以后无其它杂峰出现则提示洗脱物为同一多糖类。