RNA的转录教学PPT课件.ppt

酶 位置 转录产物 相对活性 对α-鹅膏蕈碱的敏感性 RNA聚合酶Ⅰ 核仁 rRNA 50-70% 不敏感 RNA聚合酶Ⅱ 核质 hnRNA（mRNA前体） 20-40% 敏感 RNA聚合酶Ⅲ 核质 tRNA 约10% 存在物种特异性 1.真核生物RNA聚合酶 RNA聚合酶与DNA聚合酶的区别 RNA聚合酶 DNA聚合酶 大小(M) 大，4.8×105dol 小，1.09×105dol 引物 无 有 产物 较短，游离 较长，与模板以氢键相连 作用方式 一条链的某一段 两条链同时进行 外切酶活性 无 5’ 3’，3’ 5’ 真核有三种不同的RNA聚合酶，相应地也有三类不同的启动子和有关的转录元件。 真核生物启动子 真核生物启动子的结构: 核心启动子（core promoter） 上游启动子元件（upstream promoter element，UPE） ●定义：指保证RNA聚合酶Ⅱ转录正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括转录起始位点及转录起始位点上游TATA区 1、核心启动子（II型） ●作用：有助于RNA聚合酶选择正确的转录起始位点，保证转录精确起始。 TATA-box常在-25bp左右，相当于原核的-10序列,其保守序列为：T85A97T93A85A63A83A50 ●包括CAAT盒（CCAAT）和GC盒（GGGCGG）等 2、上游启动子元件 ●作用：控制转录起始频率。 CAAT：-70 ~ -80bp GGGCGG：-80 ~ -110bp 真核生物基因的一般特点 顺式作用元件(cis-acting element)：存在于基因旁侧序列中，能影响该基因表达的序列。包括启动子、增强子、沉默子、绝缘子等。顺式作用元件本身不编码任何蛋白质,仅仅提供一个作用位点，需要与反式作用因子相互作用而发挥作用。 反式作用因子(trans-acting factor)：由其它基因编码的，能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。如转录因子（真核基因转录必需的蛋白因子）。 顺式作用元件与反式作用因子 顺式作用元件与反式作用因子 顺式作用元件 反式作用因子 反式作用因子的研究手段——凝胶迁移实验（EMSA） 增强子：是真核生物中远距离的正调控位点。与启动子的位置不固定，在两个方向上都能对附近启动子起促进转录效率的作用。 沉默子：是作用特点相同的负调控位点。 远端调控区—增强子和沉默子 增强子与沉默子 一、差异 （1）启动子只能在一个方向对邻近位置的下游基因进行转录发动； （2）增强子的作用不依赖于方向和位置；增强子可以从非常远的距离对它的靶基因转录活性增加达1000倍； 相同： 两者都没有基因特异性，但具有组织和细胞的特异性。 增强子与启动子的异同 一段具有特化染色质结构的区域，它能阻断增强子或沉默子对靶基因/启动子的增强或失活作用效应。 绝缘子 转录起始前复合物 (pre-initiation complex, PIC) 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。这一点与原核生物RNA聚合酶很不一样！ （一）转录起始 TATA TFIIB TFIIH RNA-polⅡ的转录因子 因子 功能 RNA pol II 依赖模板合成RNA TFII D 通过TATA-box结合蛋白（TBP）识别TATA-box，与TATA-box形成稳定复合物，使启动子进入转录起始状态中。 TFII A 稳定TFII D与TATA-box的结合。 TFII B 结合于TATA-box的下游，促使RNA酶组装到转录因子复合物内 TFII H 磷酸激酶活性，可以使RNA酶II的CTD磷酸化，转化为高转录活性的酶 TFII E ATPase，提供能量 TFII F 解旋酶，解开DNA双螺旋 （二）转录延伸 RNA-pol前移过程中，处处都遇上核小体。转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。 RNA-Pol RNA-Pol RNA-Pol 核小体 转录延长中的核小体移位 转录方向 上次授课内容回顾 一、原核生物线型DNA复制过程中避免5’末端缩短的机制 二、真核生物DNA复制的特点 三、真核生物避免5’缩短的机制 四、原核生物DNA复制的调控 一、RNA转录的基本概念 二、原核生物RNA的转录过程（重点） 1. 转录起始（起始复合物的组装） 2. 转录终止(a. 不依赖于ρ因子的转录终止 b. 依赖于ρ因子的转录终止) 三、真核生物RNA的转录过程 顺式作用元件和反式作用因子 四、复习与讨论 本次课程讲解内容 （第1-2节） （第3节） 转录（transcription）：在RNA聚合酶的作用下，以双链DNA中的一条单链作为转录的模板，按A