5.1单克隆抗体人源化.pdf

第五章 人源性抗体 第一节单克隆抗体人源化 通常我们制备的单克隆抗体来源于小鼠，这种抗体若用于人体的治疗，由于抗体的 免疫性会诱发机体产生人抗鼠反应，会给机体造成损伤，同时降低药物的疗效。因此， 为了解决这个问题，我们需对鼠源抗体进行人源化改造。 在学习单克隆抗体人源化之前，我们首先来回忆下抗体的基本结构与功能 （图1）。 以 IgG 类抗体为例，抗体是由 2 条相同的重链和轻链通过二硫键形成的 4 肽链结构，其 中，重链包含一个可变区（VH 区）和三个恒定区（CH 区）轻链包含一个可变区（VL 区） 和 1 个恒定区（CL 区）。重链和轻链的可变区构成特异性识别抗原的区域，可变区中 又有超变区（CDR 区），重链和轻链可变区中各自有 3 个超变区，这些超变区构成最直 接结合抗原的区域。 图 1 抗体的基本结构模式图 单克隆抗体人源化就是在保留抗体特异性的前提下降低其免疫原性的过程，因为非 人源性抗体进入人体内会引起严重的机体排异反应，进而影响抗体在临床应用时的安全 性和治疗效果，因此需要对抗体进行人源化改造，最大程度降低抗体的异源性，并且使 其特异性和亲和力保持不变。单克隆抗体的人源化发展经历了嵌合抗体、人源化抗体及 全人源性抗体等 3 个阶段 （图2）。 图 2 单克隆抗体的人源化发展历程 鼠/人嵌合是嵌合抗体的主要类型，由鼠源性抗体的可变区 (V 区)与人源抗体的恒 定区 (C区)拼接而成。优点是保留了鼠源性抗体与抗原结合的特异性和亲和力，又降低 或消除了部分鼠源性抗体作为异源蛋白对人体的免疫原性。 第二代人源化抗体就是指 CDR 移植抗体，也是指现在通常所说的人源化抗体。因为 CDR 的氨基酸序列和空间结构有多态性，是决定抗体的特异性和亲和力的关键因素。所 以，我们在做鼠源单抗人源化时仅保留 6 个鼠源单抗的 CDR 区，其它区域均换成人源的， 人源化抗体的人源性部分可达 90%以上。 CDR 移植技术的理论依据是 CDR 是决定抗原结合位点的唯一结构，因而也是抗体特 异性和亲和力的决定部位，而框架区能够接受外源成分的植入。 全人源性抗体是指完全由人类抗体基因编码而成的抗体, 其免疫原性小、临床效果 好, 是未来单克隆抗体发展的主要方向。目前, 制备全人源抗体的技术主要有抗体库技 术、转基因小鼠技术及单细胞 PCR 全人源单克隆抗体制备技术等。 嵌合抗体的制备步骤通常有：1）构建含有鼠源抗体可变区基因和人源抗体恒定区 基因的表达载体，2）转染骨髓瘤或 CHO 细胞，3）通过 G418 筛选获得稳定表达嵌合抗 体的细胞株。4）通过CHO 细胞大规模培养表达抗体 （图3）。 图 3 鼠原单抗的人源化 到 目前为止，美国 FDA 批准上市的人鼠嵌合抗体共有 5 个，其中针对 CD20 的单克 隆抗体利妥昔单抗（Rituxan）已用于淋巴瘤、类风湿关节炎、慢性淋巴细胞白血病等 疾病的治疗，其销售额稳居抗体药物的前十名，2016 年销售额达到 70 亿美元。但由于 嵌合抗体仍然存在免疫原性，容易诱导机体产生排异反应而导致药物失效，在嵌合抗体 的基础上，研究者们又开发