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高效液相色谱串联质谱检测地表水中五种生物胺 Abstract：This article introduces a high-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry detection method for detecting five biogenic amine components in surface water，introduces specific detection operation procedures，and hopes to provide reference for the water environment monitoring work of other modules and improve surface water. Bioamine detection level. Key words：High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry;Surface water;Bioamine detection 1 高效液相色谱串联质谱检测实验设计 1.1 仪器选择 本次生物胺检测实验主要仪器为Agilent 1290 Infinity Ⅱ型号的高效液相色谱仪、6460 Agilent Triple Quad型号的三重四级杆质谱仪、AutoEVA-60型号的全自动平行浓缩仪、GX-274自动固相萃取仪、DSX-18型固相萃取柱等。 测定的五种生物胺分别为腐胺、尸胺、2-苯乙胺、色胺和酪胺，以上五种生物胺标准液产品分别为美国 CHEM SEVICE公司生产的10g腐胺标准液、美国DrEhrenstorferGm_bH公司生产的0.25g、99%的尸胺标准液、日本东京仁成工业株式会社生产的25mL 2-苯乙胺标准液、美国AXROS公司生产的5g、98%的酪胺标准液和美国Kchemica公司生产的10g、98%色胺标准液。其他辅助性试剂包括乙酸铵、甲酸、氨水、甲醇、二氯甲烷、丙酮、超纯水等。 1.2 样本制备 取腐胺、尸胺、2-苯乙胺、色胺和酪胺五种生物胺标准品各适量，添加实验用超纯水，配置成1mg/mL的标准水溶液储备液，将其放在4℃恒温恒湿的环境中保存。实验前，需对储备液进行加水稀释，得到目标浓度的试验样本。 进行水样萃取，取100mL地表水水样，将其透过0.45?m的滤膜，过滤后上样至固相萃取柱上，然后使用8mL乙腈及对固相萃取柱做洗脱处理，采集洗脱液，再使用全自动平行浓缩仪将样本处理定容至1mL。 1.3 实验条件 1.3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱，规格为100×2.1mm、3.5?m，由美国安捷伦科技公司生产。 进样体积：10?L。 柱温35℃。 流动相：50%、10mmol/L的甲酸铵，pH=2的甲酸缓冲液。 1.3.2 质谱条件 电喷雾离子源。 负离子扫描。 毛细管电压为3500V。 干燥气：温度为300℃，流量为5L/min。 雾化器压力：300kPa。 鞘气：温度为250℃，流量为12L/min。 反应监测母离子、子离子、碰撞能量的色谱调谐条件：腐胺、尸胺、2-苯乙胺、色胺和酪胺五种生物胺的母离子的调谐条件分别为89.2m/z、103m/z、123m/z、162m/z和136m/z;子离子的调谐条件分别为55.5m/z、69.1m/z、77.4m/z、117.0m/z和77.2m/z;碰撞能量的调谐条件分别为20V、15V、30V、25V和29V。 1.4 检测方法 精确量取10mL水样，添加浓度为2mol/L的氢氧化钠溶液和饱和碳酸钠溶液，调节样本pH值到12。然后添加浓度为5mg/mL的丹磺酰氯-丙酮溶液2mL和250?L的二氯甲烷，振荡混合均匀后，在50℃的水浴锅中加热20min，促使样本中物质充分反应。 2 地表水中五种生物胺檢测结果分析 2.1 实验条件优化 2.1.1 色谱条件优化 比较不同流动相下五种生物胺的色谱峰形，发现在甲醇+水或甲醇+甲酸铵/氨水条件下，色谱分析的峰形为扁平状，且存在较严重的拖尾，出峰时间稳定在1min左右。在甲醇+甲酸铵/甲酸条件下，色谱分析的波形得到显著优化，且出峰时间的独立性更高，因此考虑到实验结果观察的清晰性，决定以甲醇+甲酸铵/甲酸作为流动相。 2.1.2 质谱条件优化 对生物胺单体标准样本进