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生物化学一实验七邻甲苯胺法测定血糖 实验七邻甲苯胺法测定血糖 【廿的要求】 掌握邻甲苯胺血饿測定法的基本原理及操作方法。 熟悉邻甲苯胺血糖测定法的影响因素及控制方法。 了解邻甲苯胺血糖测定法的临床意义及应用。 【实验原理】 血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟 甲基a-吠喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff Wo血清中的 蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法 处理，在680nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。邻甲苯胺法测得正常空 腹血糖值为 3. 9, 5. 6mmol / L （70,100mg %） ? CHOH——CHOH HC——CH 酸中？ CHOH CHOH—CHO C C—CHO HOHC 2H0HC 0 2 H0 2己醛糖羟甲基糠醛 CH3 CH 3 HC CH HN— 2 C C—CH ,N— HOHC 0 2 邻甲苯胺 醛亚胺（兰色）【实验准备】 一、 器材 721型分光光度计、沸水浴。 5 X 15cm试管、刻度吸量管。 二、 试剂 邻甲苯胺试剂称取硫脈(AR)级2. 5g,溶于750ml冰醋酸(AR级)中，将此溶 液转移入1L容量瓶内，加入刚蒸個过的邻甲苯胺150ml, 2.4,硼酸溶液100ml 冰醋酸至1000ml刻度，置棕色瓶中至少可用两个月。 葡萄糖标准储存液(10 mg / ml)用0.25,苯甲酸溶液配制。 葡萄糖标准应用液(ling / ml)取陰存液10ml放入100ml容量瓶中，用0. 25, 苯甲酸溶液稀释至100ml o 【实验操作】 采得待测血样(抗凝)后立即离心以分离血浆(3, 000转离心15分钟)。 取干燥试管3支，分别标出号码，按下表添加试剂。 邻甲苯胺法测血糖操作表 管别測定管标准管空白管试剂(ml) 血清(浆)0. 20ml ?? ?? 葡萄糖标准液？？ 0. 20ml ?? 蒸饷水?? ?? 0. 20ml 邻甲苯胺试剂6.0ml 6. 0ml 6. 0ml 3.混匀务管内容物置沸水浴中加热15分钟 后取出用流水冷却。4.以空白管校正零点，读取各管680nm处吸光度值。 5.计算 测定管吸光度100/0. 2血糖mg%, X葡萄糖标准液值X标准管吸光度 【注意事项】 本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与穂醛起反应，不与血中其他还原 物质起反 应。故测定值较Folin-吴宪法为低。 显色反应与水的含量有关，故应使标准管和测定管的含水量一致。3.温度 对显色反应有明显影响，煮沸时间和温度应准确控制。4.显色后颜色不稳定，室 温每放置1分钟，颜色降低0.15,0 5.邻甲苯胺试剂中冰醋酸浓度很高，使用不 当容易损坏比色仪器.6.邻甲苯胺是致癌剂，测定过程中应小心使用。 【思考题】 试讨论血糖測定的临床意义及应用。 哪些因素影响邻甲苯胺法测定血糖的显色反应,操作过程中如何减少这些因 素对测 定结果的影响，