免疫组化实验结果的判定和分析[汇编].docxVIP

精品资源·有用参阅品 文档收拾 | 学习参阅 Summary compilation 免疫组化试验成果的断定和剖析 免疫组化试验成果的断定和剖析 就试验成果而言，免疫组化技能服务首要触及抗体试验成果的描绘与剖析、图片的确认与选取、相关数据的供给，上述作业是免疫组化作业的要点内容。只要严厉的试验规划、规范的试验操作、专业化的成果剖析才干满意客户的要求，更好地为客户供给最优质的服务。免疫组化成果的断定准则：⒈有必要一起设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色成果是不可信的。⒉抗原表达有必要在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上等等。不在抗原地点部位的阳性上色，一概不能视为阳性。⒊阴性成果不能视为抗原不表达。由于检测办法灵敏度有凹凸之分，有时可因染色办法灵敏度不行，而导致阴性反响，判别时应留意。⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边际细胞的阳性表达，特别是酶免疫符号。由于这类阳性上色多系内源搅扰，或系人为要素所形成的。⒌对免疫组化符号成果的含义不能绝对化，应结合临床材料、X线等印象学及试验成果归纳剖析。对照染色规划：(一）对照染色的意图设对照的意图是为了扫除假阴性和假阳性。假阴性的原因首要有三种：① 安排处理不妥，抗原丢掉过多或被遮盖；② 抗体失活、效价过低或稀释度不合适（首要指一抗，即特异性抗体）；③ 染色过程遗失及过失，或显色剂的挑选、缓冲液pH和离子强度不妥等。假阳性均系由多种要素形成的非特异上色所形成的，原因首要有：① 自发荧光或内源酶等搅扰；② 抗体试剂不纯(特别是一抗）；③ 操作失误，如污染、切片干燥或显色剂操作不妥等；④ Fc受体的搅扰，等等。（二）对照的品种及其选用意图 对照染色大致可分为四类：即阳性安排对照、阴性安排和阴性试剂对照及本身对照。⒈阳性安排对照 指用已证明含有靶抗原的同源及不同源安排切片或细胞涂片与待检试验切片一起作相同处理和免疫染色的安排对照。正确的成果应出现阳性，意图是为了证明所用免疫组化染色流程的有效性，扫除假阴性的或许。⒉阴性安排对照 指用已证明不含靶抗原的同步处理和免疫符号染色的安排对照。正确的成果应为阴性，意图是在外假阳性。⒊阴性试剂对照是指用于证明在免疫组化染色中所用试剂，尤其是特异性抗体试剂的有效性和可靠性而所建立的同步免疫染色对照，包含有：空白对照、代替对照、吸收试验和按捺试验等。意图在于在外假阳性和证明所用免疫组化试剂及其技能办法的有效性和待检试验切片免疫符号阳性成果的可靠性。⑴ 空白对照指以缓冲液（PBS、TBS等）替代榜首抗体（首要的，必要时还可做第二抗体及桥联抗体的空白替代），其他各步不变的试剂对照染色，成果应为阴性。⑵ 替代对照指以所用办法榜首抗体同源动物的正常血清，或与本试验无关的抗体(靶生物缺如的)替代榜首抗体，其他过程不变的试剂对照染色，成果应为阴性。⑶ 吸收试验是指用事前经过量抗原吸收的榜首抗体上清液替代榜首抗体，其他过程不变的免疫染色试剂对照。成果应是阴性或阳性上色显着削弱（吸收不全时）。⑷ 按捺试验是指用符号抗体和未符号抗体（可所以一抗，也可所以二抗或桥抗体）两者的混合物作试剂，其他过程不变的免疫组化染色试剂对照，成果其阳性上色应成份额的削弱（等量或1：9）。此试剂对照多用于直接法。这类阴性试剂对照的选用准则是：① 空白对照不能省，其他对照在预试验中应多做，尤其是使用新抗体试剂；② 对照必需与试验片同步进行染色；③ 对照的成果应附合要求。⒋本身对照 是指在同一符号切片上的本身安排成分的阴性布景对照。即与靶抗原阳性反响细胞或成分相邻的阴性布景结构的显色，成果应为阴性或上色较浅，需与阳性上色成分呈鲜明对比。意图在于扫除内源性搅扰发生的假阳性和因抗原弥散移位形成的过错成果。非特异性染色：非特异染色是指免疫组化染色过程中发生的非靶抗原的呈色成果，属假阳性，又称布景上色，能严峻搅扰免疫组化染色成果的正确判别，应极力防止或减轻。其原因触及免疫组化染色流程的各个环节，可来自：① 内源性搅扰(自发荧光、内源酶、内源性生物素等)；② 试剂污染(质量差，穿插反响，Fc受体搅扰等)；③ 安排处理不妥(安排固定不及时或固定不良所导致的抗原弥散移位、洗刷不充分所导致的游离试剂残留等)。纠正的办法视原因而异，可在预试验基础上，选用有针对性的纠正对策，即对症下药。阳性符号的形状特征和判别：免疫组化符号具有必定形状特色，若能熟练掌握则有助于对免疫组化符号成果的正确判别。特色包含定性、定位和定量三方面。免疫显色强度和阳性细胞密度是定性定量目标，实际作业中常选用强度和密度结合的办法归纳计量，与抗原含量有关；阳性细胞的上色