药品质量控制 液相色谱法的类型 3-液相色谱法的类型.pptVIP

药品分析技术 第1课时-第1章节 液相色谱法的类型 1.吸附色谱 2.分配色谱 3.离子交换色谱 4.空间排阻色谱 5.亲和色谱 第1课时-第1章节 液相色谱法的主要类型 第1课时-第1章节 1 吸附色谱 以多孔的固体吸附剂为固定相，利用溶质分子和流动相分子在吸附剂表面的吸附活性中心上进行的竞争吸附能力的不同进行分离 以极性固定相为例：溶质分子上官能团极性的或数目的增加，都会导致其在固定相上的保留时间增加 溶质的保留值大小与空间效应有关，还与吸附中心的几何排布有关，因此非常适合结构异构和异族化合物的分离 制备色谱常用 第1课时-第1章节 固体吸附剂 极性 非极性 氧化铝与氧化镁 硅酸镁分子筛 硅胶（酸性） 多孔微粒活性炭 多孔石墨化碳黑 苯乙烯-二乙烯基苯共聚物的单分散多孔小球 碳多孔小球 第1课时-第1章节 流动相 硅胶、氧化铝等极性固定相，应该选择戊烷、己烷等弱极性溶剂做主体，适当加入二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯等中极性或四氢呋喃、乙腈、异丙醇等极性溶剂改性，以调节洗脱强度，实现不同组分的良好分离效果 苯乙烯-二乙烯基苯共聚微球等非极性固定相，则应以水、甲醇等极性溶剂做主体，适当加入乙腈、四氢呋喃等改性 第1课时-第1章节 2 分配色谱 分离模式： 正相色谱：固定相极性流动相极性，适于极性组分分离 反相色谱：固定相极性流动相极性，适于非极性组分分离 第1课时-第1章节 正相色谱 低极性流动相 反相色谱 高极性流动相 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 时间 时间 待测物极性：ABC 正、反相色谱中极性和保留时间的关系 第1课时-第1章节 流动相的选择 对于正相色谱：流动相的选择类似固定相为极性吸附剂的液固色谱。流动相主体为己烷、庚烷，可以加入小于20%的改性剂如1-氯丁二醇、异丙醚、二氯甲烷......乙腈、甲醇等，可以使得k?减小，洗脱能力增强。 对于反相色谱：流动相的选择类似固定相为非极性吸附剂的液固色谱。流动相主体为水，可以加入四氢呋喃、甲醇、乙腈等改性，使得k?减小，洗脱能力增强。 第1课时-第1章节 离子交换色谱 原理：固定相（离子交换剂）表面具有带电荷的基团。该基团带负电荷（如磺酸基和羧酸基）可用于阳离子的分离；带正电荷（如季胺盐）可用于阴离子的分离。不同离子与固定相的静电作用力大小不同，因此被保留的时间长短亦不同，从而实现分离。 固定相：硅胶（表面键合带电荷基团）：合成树脂或纤维素（表面修饰带电荷基团） 流动相：以水相缓冲溶液为主，有时加少量的有机改性剂；改变pH和盐种类及其浓度，可改变选择性。 第1课时-第1章节 4 空间排阻色谱 原理：以多孔性物质作固定相，样品分子受固定相孔径大小的影响而实现按分子量大小分离，又称凝胶色谱。 外水相 分子（分子量）越大的物质在通过色谱柱时所走的途径越短，因此越先流出，反之亦然。 第1课时-第1章节 分类 凝胶过滤色谱（GFC）： 采用亲水性固定相，以水或缓冲溶液作流动相的凝胶色谱法。主要适合于水溶性高分子的分离。 凝胶渗透色谱（GPC）： 采用疏水性固定相，以有机溶剂作流动相的凝胶色谱法。主要适合于脂溶性高分子的分离。如甲苯和四氢呋喃能很好地溶解合成高分子。GPC主要用于合成高分子的分子量（分布）的测定 第1课时-第1章节 5 亲和色谱 亲和特异性： 抗原-抗体；酶-底物；激素-受体；RNA-互补DNA 作用原理： 在载体表面先键合具有一般反应性能的环氧或联氨（间隔臂），然后再连接上配基（酶、抗原或激素）。当含有复杂混合试样的流动相流经这种经固定化的配基时，具有亲合力特性的生物大分子与配基相互作用而被保留，而无此作用的则被洗出；随后改变流动相pH或组成，再将被保留的大分子组分以纯品的形式洗脱出来。 第1课时-第1章节 主要用于蛋白质和生物活性物质的分离与制备 感谢聆听 Thanks for listening