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医学免疫学实验指导 实验十三免疫浊度试验 由长沙达尔锋生物科技有限公司整理 【文章介绍】 实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。 BioRike博瑞克根 据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了 14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验 原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。 BioRike简介：BioRike （中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品 品牌，由旗下专业的生命科学实验室 BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生 命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以 Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫 检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。 【实验目的】 掌握免疫浊度测定的原理，熟悉其操作方法，了解其应用及意义。 【实验原理】 抗原和抗体在液相中反应， 所形成的免疫复合物使液相出现浊度， 复合物的量与浊度呈正相 关。这种浊度可以反射、散射和吸收入射的光线，使入射光衰减，因此可通过测定透射光衰 减（以A值表示）或散射光强度来检测抗原抗体反应。本实验以常用透射比浊法检测人血 清IgG为例。在反应系统中IgG抗体过量时，所形成的免疫复合物与血清 IgG量呈正相关, 而形成的浊度大小与入射光的衰减呈正相关，因此测定 A值反映液相中的抗原量，通过参 照标准曲线或标准品数值的计算，即可得知待测血清中 IgG含量。 【实验用品】 标本：待测人血清、标准血清（混合正常人新鲜血清）、人IgG标准品（或冻干人血清IgG 参考标准）。 PEG 溶液：PEG 6000-8000 4.0g 、NaF 1.0g、Na2HPO4 ?12H2O 10.15g 、NaH2PO4 ?2H2O 1.0g、NaN3 0.1g ，加蒸馏水至 100ml。 其他试剂：羊抗人IgG抗血清、生理盐水、蒸馏水。 主要器材：分光光度计（721或731等）、水浴箱、微量移液器、刻度吸管、试管等。 【步骤和方法】 系列标准管准备：用生理盐水稀释人 IgG标准品或人血清IgG工作标准，使其浓度分别 为5.5g/L、11.0g/L、22.0g/L、44.0g/L （浓度可根据不同制剂略有变动） 。取上述IgG标 准液10讪，分放于4个试管中；另取生理盐水 10 M，放于第5只试管中，作为空白对照。 分别做好标记。 2?血清管准备：将待测血清和标准血清均做 1:10稀释(0.1ml血清+1.0ml生理盐水)，各 取10讪，分放于预先标记的试管中。 抗体制备：用PEG溶液稀释羊抗人IgG抗血清，注意保持适宜的抗体浓度。 抗原抗体反应：向各标准管和血清管中分别加入稀释抗血清， 混匀后至37 C水浴30min 。 测定：用分光光度计进行测定，使用 340nm波长，用生理盐水校正零点。逐次测定各标 准管和血清管，准确读取和记录各自的 A值。 【结果和评价】 以4个浓度的IgG标准品的A值为纵坐标，以其分别的IgG含量为横坐标，绘制出标准 曲线。各血清管IgG含量可从标准曲线上查得。标准血清的 IgG含量应该处于正常参考值 的范围以内，否则应考虑实验结果可能有问题。 也可用分段直线计算法得到结果，举例如下： 标准管序号 1 2 3 4 标准管IgG 含量(g/L ) 5.5 11.0 22.0 44.0 标准管A值 0.04 0.08 0.14 0.26 血清管A值 0.10 以上例子中，血清管的 A值位于标准管1和标准管3之间，计算如下： (22.0-11.0 ) /(0.14-0.08) X(0.10-0.08 ) +11.0=14.7(g/L) 正常血清IgG 参考值8.0-16.0 g/L 。 【注意事项】 1.由于不同制品羊抗人 IgG抗血清的效价不同，所以对每批制品都需要测定最适宜的抗体 浓度。 PEG的分子量不同，性质也有所区别； PEG溶液浓度不同所沉淀的免疫复合物也不同, 浓度越大沉淀的复合物越小。 20g/L浓度只能沉淀较大复合物，40g/L浓度可沉淀较小复合 物，但浓度〉50g/L , PEG选择性沉淀免疫复合物的特征即行消失。 【临床意义】 1?血清IgG降低，主要见于先天性低IgG血症，例如Brut on型免疫球蛋白缺乏症和联合免 疫缺陷病等。亦可见于获得性低免疫球蛋白血症，常低于 5.0g/L,例如剥脱性皮炎、肠淋巴 管扩张症、肾病综合征、淋巴肉瘤、霍奇金病等。 2?血清IgG升高，主要见于各种感染性疾病、 肝脏疾病（慢性活动性肝炎、 原发性胆汁型肝 硬化等）和自身免疫病等。 【思考题】 1.免疫浊度实验的原理及试验中的主要注意事项是什么 ？ 2?血清IgG异常时涉及哪些疾病？ 那是心与心的交汇，是相视的莞 尔一笑，是一杯饮了半盏的酒，沉香在