cpgodn的免疫刺激作用.ppt

CpG-ODN 的免疫刺激作用 陈军浩 南京大学医学院附属鼓楼医院 CPG 概念 ? 为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重 复序列，即 CpG 基序。 ? 一种免疫佐剂 ? 作用靶点 TLR9 ? 细胞免疫，体液免疫 Th1 免疫应答 ? 慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 ? HBV 免疫耐受，持续感染 ? 肿瘤微小残留病的清除 CPG 提高 PBMC 中 Th1 细胞 Th1 占淋巴细胞百分比 CPG 提高 PBMC 中 Th1 、 Tc1 细胞百分率 0 2 4 6 8 10 12 14 16 Th1 Tc1 Th2 对照 CPG-ODN * * * ： 与对照组比较， P<0.05 CPG 刺激 BPMC 分泌细胞因子 0 10 20 30 40 50 60 70 80 IFN- γ IL-2 IL-4 IL-10 对照组 CPG-ODN组 * * ： 与对照组比较， P<0.05 CPG 诱导 PBMC 杀伤靶细胞 1. 收集 CPG 活化的 PBMC 2. 细胞毒性实验：效应细胞为 CPG 活化的 PBMC ；靶细胞为 CFSE 预染的 K562 细胞。 对照组效应细胞为未经 CPG 活化的 PBMC 。 3. 效：靶＝ 20 ： 1 ，混合培养 2h 。流式细胞术 检测靶细胞死亡率。 CPG 诱导 PBMC 杀伤靶细胞 CFSE 染色靶细胞 1. 浓度为 5μmol/ L 的 CFSE （ 2 羧基荧 光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液 2. 取对数生长期的靶细胞浓度 108/ L 3. 细胞悬液与等体积 CFSE 工作液混合 4. 37 ℃孵育 10 min 。 5. 离心洗涤两次后 6. 悬浮细胞备用 CFSE 染色靶细胞 实验结果 CpG 活化 PBMC 对 K562 细胞的杀伤作用 (N=5) CPG 活化 PBMC 16.85 ± 5.14 % 对照组 8.62 ± 2.83 % * * ： 与对照组比较， P<0.05 CIK 细胞杀伤靶细胞 CIK 细胞杀伤靶细胞 研究背景 通过主动免疫、过继特异性免疫、 过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙 肝患者体内残存的 HBV ，达到治疗效 果 。 研究背景 B 淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质， 同时具有 CpG-ODN 受体： TLR-9 。本研究 探讨 CpG-ODN 诱导 B 淋巴细胞成为高效 APC ，使之具有类似于树突状细胞功能 的可行性。 TOLL 受体 TOLL 受体在血细胞中的表达 活化 B 细胞负载核心抗原 1. 磁珠分选 B 淋巴细胞 2. CPG 活化 B 淋巴细胞 3. 核心抗原肽 :FLPSDFFPSV-FITC 4. 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载 状况 磁珠分选 B 细胞 分选前 B 细胞 7.89% 分选后 B 细胞 89.6% 活化 B 细胞负载抗原肽 Mark e r % Gated Al l 10 0.00 M1 41.3 4 M1 活化 B 细胞负载核心抗原 荧光显微镜观察 B 细胞负载 HBcAg18-27 肽 APC 与 T 细胞作用机制 CPG 对 B 细胞抗原递呈相关分子的 作用研究 1. CpG2006 、 2216 由上海生物工程技 术服务有限公司合成，全硫代化修饰 2. 对照组为含 10üS 的 RPMI1640 ＋ 外周血 PBMC ，细胞量 10 7 / 孔， 37 ℃、 5%CO 2 、 48 小时 3. 实验组加入 CpG2006 或 CpG2216 ， 终浓度均为 1umol/mL ，余同上 CpG 提高淋巴细胞 CD69 表达 0 5 10 15 20 25 30 35 对 照 C p G 2 0 0 6 C p G 2 2 1 6 对 照 C p G 2 0 0 6 C p G 2 2 1 6 T 淋巴细胞 B 淋巴细胞 CD69 表 达 率 （ % ） * * * ： 与对照组比较， P<0.05