肝炎病毒抗原抗体检测综述.pptVIP

2018/10/12 1 肝炎病毒抗原抗体检测的 原理及检测试剂的选择原则 解放军第四七四医院 张和平 2018/10/12 2 ELISA 原理 HBsAg: 双抗体夹心法 H BeAg : 双抗体夹心法 抗 HBs : 双抗原夹心法 抗 Hbe: 竞争 法 抗 HBc: 竞争 法 2018/10/12 3 ? 1. 在一步法测定中，当标本中 受检抗原的含量 很高时 ，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合， 而 不再形成 “夹心复合物 ”。 ? 2. 类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，如 按常法测定， 所得结果将低于实际的含量 ，这种现 象被称为钩状效应（ hook effect ） ? 3. 因为 标准曲线到达高峰后呈钩状弯落 。钩状 效应严重时，反应甚至可不显色而出现 假阴性结果 。 ● 双抗体夹心法 2018/10/12 4 两对半与美国 Abbott 试剂的比较 河北医学杂志（新） 2005 年 第 10 期 总第 10 期 ( 月刊 ) 论著 乙型肝炎病毒（ HBV ）标志物是国内实验室经常检测的项 目。两对半试剂生产厂家较多，试剂质量良莠不齐。五家 试剂公司分别为英科 新创 （厦门）科技有限公司、上海 荣 盛 生物技术有限公司、北京 万泰 生物药业有限公司、 珠海 丽珠 试剂有限公司、 深圳月亮湾 生物工程有限公司。各厂 家质量有较大差异 , 为了提高乙肝两对半的检验质量，避免 误诊、漏诊，以 美国 Abbott 试剂作为参比试剂，对五家公司 的两对半试剂的质量进行了对比、评价 ［ 4 ］。 2018/10/12 5 两对半与美国 Abbott 试剂的比较 1. 本次试验 Abbott Axsym 系统检测标本中 HBsAg 结 果最高至 210 S/CO ， HBsAb 结果最高至 6000 mIU/mL ， HBeAg 最高至 11600 PEIU/mL ，以 Abbott 试剂测定标本的 S/CO 值为横坐标，五家试剂测定 相应标本的 OD 值为纵坐标，分别绘出了 HBsAg 、 HBsAb 及 HBeAg 的浓度关系图，故在实际应用中的 许多一步法试剂仍有 HOOK 效应存在。对于 HBsAg,A 、 C 、 D 三家试剂存在 HOOK 效应 ； 对于 HBsAb,A 试剂存在 HOOK 效应；对于 HBeAg ， D 试 剂存在 HOOK 效应。此结果可供临床检验部门参考。 2018/10/12 6 两对半与美国 Abbott 试剂的比较 1. 五家试剂对于 HBsAg,HBsAb,HBeAg 项目的可检出检测下 线分别为 5.0 S/CO 、 17 mIU/mL 、 8.5 PEIU/mL, 2 而 Abbott 试剂的阳性检测下线分别是 1.0 S/CO 、 10 mIU/mL 、 0.28 PEIU/Ml, 说明五家试剂在灵敏度上均低于 Abbott 试剂 , 3. 国外全自动分析仪系统检测灵敏度，速度，准确性均高于 国内试剂。 4. 各家 ELISA 试剂的各个检测项目特异性均较好，灵敏度相 对较差，尤其是 HBeAg ， 需要提高灵敏度［ 11 ］。结果表明 除对于 HBcAb 试剂 D 的相对灵敏度较差外；其它的各家试剂 的各个检测项目的 相对灵敏度、相对特异性及总符合率均较 好 ，基本上能满足临床及实验室的要求，此结果可供参考。 2018/10/12 7 ● 双抗体夹心法 ? 4. 因此在使用一步法试剂 测定标本中含量可异常增高的物 质（例如血清中 HBsAg 、 AFP 和尿液 hCG 等）时，应注意 可测范围的最高值。 ? 6. 双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（ RF ） 的干扰。 RF 是一种自身抗体，多为 IgM 型，能和多种动物 IgG 的 Fc 段结合。 2018/10/12 8 双抗体夹心法 7. 用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有 R F ，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶 标抗体结合， 表现出假阳性反应。 8. 双抗体夹心法 ELISA 试剂是否受 RF 的影响， 已被列为这类试剂的一项考核指标。 9. 假使在被测分