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葛根素注射液浓度 葛根素（ Puerarin ）广泛应用于缺血性心脑血管疾病的治疗。随着临床的广泛应用，发现该药有溶血反应、过敏反应和肝、肾损害等严重 不良反应［ 1～10］。在国家药品不良反应监测中心病例报告数据库中，相关葛根素注射剂的严重不良反应报告以急性血管内溶血为主。葛根 素注射剂导致急性血管内溶血具有发病急、进展快、病情危重的特点 11，12］。中国政府药品主管部门（药品食品监督管理局）已多次发出增强管理的通告，注意葛根素注射给药引起溶血的风险评价，并增强临床监控。在我们前期研究中发现，葛根素注射液在高浓度时， 24 条 Beagle 犬红细胞的溶血概率为 70％左右。本研究通过体外溶血 实验，探讨葛根素注射液对红细胞膜脆性的影响及葛根素注射液浓度对红细胞溶血率的关系。现报道如下。 器材 1.1 受试药物葛根素注射液，购自广州大日生物科技有限公司，批号规格：含 50mg/mlPuerarin 。 1.2 动物白化豚鼠，雌雄各半，体重 250～400g，由广州中医药大学 实验动物中心提供，合格证号： 2003A002。饲养环境：室温 25～27℃，相对湿度 60%～78%。Beagle 犬 24 只（体重 6～8kg，雌雄各半），由广东省医药工业研究所 Beagle 犬养殖场提供，合格证号：医动字 0014298。饲养环境：室温 25～27℃，相对湿度 70%～80%。 物药业有限公司生产；注射用水，批号： 200508011，广州铁路中心医院生产； 22XLJ-II 型离心沉淀机，上海医用仪器厂； SPX－ 150B生化培养箱，上海康华生化仪器制造厂。 方法［ 13］ 2.1 热诱导法考察葛根素注射液对红细胞膜稳定性的影响考察葛根素注射液对 beagle 犬 RBC的影响：将 6 种浓度葛根素注射液（氯化钠注射液稀释）分别与 0.05ml50%的 beagle 犬 RBC悬液装于洁净试管中， 混合，摇匀，置 50℃生化培养箱保温 30min，同时设阴性 ( 氯化钠注射液) 及阳性 ( 注射用水 ) 对照管。育毕 , 置冰浴冷却， 2000r/min 离心10min，吸取上清液 , 紫外分光光度计比色，于 540nm下测吸光度 , 计算RBC溶血率。溶血率（ %）＝（样品管的吸光度－阴性对照管的吸光度） （阳性对照管－阴性对照管的吸光度）× 100%。计算平均溶血率，结果见表 1 及图 1。 2.2 葛根素注射液对红细胞的溶血作用 2.2.1 葛根素注射液对 Beagle 犬红细胞的溶血作用取狗血 10ml，用牙签持续挑去纤维蛋白原，成脱纤血，用 NS稀释，摇匀，离心，弃上清液。沉淀的红细胞再用 NS 反复洗涤 2～3 次，至离心后上清液无色。将所得红细胞按其体积用 NS 配成 2％悬液（当天使用，使用时摇匀）。取试管 6 支，标号。①～④号管分别加入 5％的葛根素注射液 0.1 ， 0.2 ，0.4 ，0.8ml ，加 NS稀释至 2.5ml ，涡旋 15s 使其充分溶解。各管葛根素终浓度分别为： 1，2，4，8mg/ml。5 号加 2.5ml 的 NS（做阴性对照管）；上述 5 管与 2％的红细胞悬液 2.5ml 混合，摇匀。 6 号管加 入 2％的红细胞悬液 2.5ml ，离心，除去 NS，加注射用水溶解至 5ml，摇匀，作为阳性对照管。将各管置于 37℃恒温箱孵育 6h。然后观察各管的溶血水准及血细胞的凝集；取上清液，离心，用紫外分光光度计 于波长 540nm下测定吸光度（ OD值）。按公式：溶血率（％）＝（样 品管 OD值－阴性对照管 OD值） / （阳性对照管 OD值－阴性对照管 OD 值）× 100%，计算各管的溶血率。此实验用不同 Beagle 犬细胞重复 4 次，求 4 次结果的平均值。结果见表 2 及图 2。 2.2.2 葛根素对豚鼠红细胞的溶血作用取健康豚鼠 6 只，心脏采血 3ml，用肝素抗凝。 1500r/min 离心 10min，除去血清，用 NS稀释，摇 匀，离心，弃上清液。沉淀的红细胞再用 NS反复洗涤 2～3 次，至离 心后上清液无色。所得红细胞按其体积用 NS配成 50％悬液（当天使用， 使用时摇匀）。每例动物血样取试管 8 支做实验，标号。 1～6 号管分 别加入 5％的葛根素注射液 0.025 ，0.05 ，0.1 ，0.15 ，0.20 ， 0.25ml ， 加 NS稀释至 2.45ml ，涡旋 15s 使其充分溶解。各管葛根素终浓度分别 为： 0.5 ，1，2，3，4，5mg/ml。7，8 号分别加 NS、注射用水 2.45ml 作阴性及阳性对照管。上述 8 管均加入豚鼠 50%红细胞悬液 0.05ml 并混匀，置入 37℃恒温箱